周珊珊，许宗斌，鲁 伟

(贵阳市肺科医院 药剂科，贵州 贵阳 550003)

卵巢癌是一种常见的妇科肿瘤，尽管发病率位于子宫癌之后，但死亡率居于妇科肿瘤首位，严重影响患者的生活质量和生育能力［1］。除手术切除外，化疗是常用的治疗手段，但长期使用毒副作用大，因此需探讨有效的治疗方法［2］。狼毒大戟是一种含二萜醇类化合物，对多种恶性肿瘤有较好的治疗效果，如肺癌、胃癌及肝癌等，且未发现长期化疗的不良反应［3-4］。岩大戟内酯 B(Jolkinolide B，JB)是狼毒大戟的主要成分［5］，研究表明其可通过抑制PI3K/Akt信号通路来诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡［6］。提示JB可用于恶性肿瘤的治疗。但目前对JB能否抑制卵巢癌的研究较少，因此本研究给予人卵巢癌Skov3细胞JB处理，观察对其增殖的影响，为临床卵巢癌的治疗提供依据。

1 材料

JB(纯度≥98%)，上海惠诚生物科技有限公司;LY294002(PI3K抑制剂)，美国Sigma公司;人卵巢癌Skov3细胞，美国ATCC;二甲亚砜(DMSO)、TritonX100、胎牛血清、RPMI 1640培养基、胰蛋白酶，美国 Gibco公司;β-actin、辣根过氧化物酶(HRP)标记鼠二抗、兔二抗单克隆抗体，美国Santa Cruz 公司;Akt、P-Akt(Ser473)、Bax、Caspase-3 和Bcl-2多克隆抗体，美国Cell Sigaling Technology公司;其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 细胞传代培养

将人卵巢癌Skov3细胞接种于含10% 胎牛血清的RPMI 1640培养基60 mL中。培养2～3 d后，置于倒置显微镜下观察，待细胞形态为致密单层时，移除培养基并用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗细胞3次，用37℃预热的0.25%胰酶消化细胞1 min左右，待细胞呈现圆形时，加入少量RPMI 1640培养基终止消化，1 500 r/min离心5 min，收集细胞沉淀，并采用RPMI 1640培养基重悬细胞，按5×105/mL将卵巢癌Skov3细胞接种到培养瓶中，在37℃、5%CO2下培养。……