李茹冰，李若冰，王翠玲，张宜俊，李 超，傅泳航

(1.广州军区广州总医院 药剂科，广东 广州 510010;2.广东省人民医院 心外科，广东 广州 510000;3.广州市恺泰生物科技有限公司，广东 广州 510620;4.解放军第四五八医院 检验科，广东 广州 510600)

白细胞介素-12(IL-12)是由35 kD的轻链和40 kD的重链组成的异源性二聚糖蛋白，由抗原递呈细胞在受到刺激后分泌。IL-12可启动细胞介导免疫，活化T细胞和NK细胞，增加Th1细胞数量，使其在细胞中占绝对优势，增强CD8+T细胞的细胞毒性［1］，并抑制Th2型细胞免疫，是形成特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的枢纽因子［2］，已经在不同模型动物的肿瘤和传染性疾病的治疗上显示出潜质［3-4］。傅泳航等［5］研究发现，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合重组鼠白细胞介素-12(rmIL-12)可明显增强免疫小鼠脾细胞分泌 γ-干扰素(IFN-γ)的水平，表明IL-12对于乙肝疫苗具有免疫增强作用，且导向Th1型免疫应答。吴长有等［6］发现，重组人白细胞介素-12(rhIL-12)促使慢性HBV携带者外周血单核细胞(PBMC)产生HBV特异的中枢记忆性CD8+T淋巴细胞的免疫应答，显示其在临床应用方面具有较好的发展潜力。本文对rhIL-12刺激健康人PBMC产生IFN-γ的细胞来源及对IL-12R的影响进行了研究。

1 材料

1.1 受试者

健康人8例，均曾接种过乙肝疫苗，HBV血清学指标如下:HBsAg(－)、抗 HBs(+)、HBeAg(－)、抗Be(－)、抗 HBc(－)。

1.2 试剂

rhIL－12(批号20080611)，广州市恺泰生物科技有限公司;重组HBsAg(rHBsAg)疫苗，深圳康泰生物制品股份有限公司;RPMI 1640、Hanks'液和胎牛血清，美国GIBCO公司;Ficoll淋巴细胞分离液，上海华精公司;人 IFN-γ酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒、TMB底物显色剂、CD3PE、CD8FITC、CD4PreCP、CD3FITC、CD56PE、IFN-γ、APC(别藻蓝蛋白，Allophycocyanin)、CD212(IL-12Rβ1)PE、CD212(IL-12Rβ2)PE、CD8 FITC(异硫氰酸荧光素)、CD4 APC、CD56PE-CY5，美国 BD 公司。

1.3 仪器

MultiskanMK3酶标仪，上海精科实业有限公司;FACS Calibur流式细胞仪，美国BD公司。……