王凤霞，刘 明，王 惠，刘 格，吉爱国

(1.山东大学药学院，山东 济南 250012;2.中国科学院海洋研究所，山东 青岛 266071;3.山东省科学院生物研究所，山东 济南 250014)

中华真地鳖(Eupolyphaga sinensis Walker)俗称土鳖子、土元等，是一种土栖的蜚蠊目(Blattodea)昆虫，广泛分布于全国各地，目前已实现大规模人工饲养。中华真地鳖作为一种传统中药，在我国具有悠久的药用历史。现代研究表明中华真地鳖具有抗血栓［1］、抗肿瘤［2-3］、促进骨折愈合［4］、免疫保护［5］等十分广泛的药理作用。近年来，国内学者相继从中华真地鳖中分离得到了抗肿瘤活性组分［2-3］及溶栓活性组分［6-8］等。本研究采用现代生化技术从该昆虫中分离得到了一分子质量约为72 kD的抗肿瘤蛋白组分(EPS72)，并初步探讨了其体外抗肿瘤活性。

1 材料与方法

1.1 材料

中华真地鳖购于山东潍坊春源昆虫食品有限公司，－20℃ 冷冻保存备用。

人肺癌细胞株A549、肝癌细胞株Bel-7402、宫颈癌细胞株Hela、结肠癌细胞株RKO以及胰腺癌细胞株Panc-28均购自中国科学院上海细胞库。

CM-Sepharose Fast Flow、DEAE-Sepharose Fast Flow、HiTrap Q-Sepharose HP 柱(1 mL)、HiTrap Butyl Sepharose HP柱(1 mL)、Superdex 75 10/300GL柱均为瑞典GE Healthcare公司产品;10 kD MWCO离心超滤管购于美国Millipore公司;BCA蛋白含量检测试剂盒购于美国Pierce公司;蛋白Marker为美国Fermentas产品;四甲基偶氮唑盐(MTT)和二甲亚砜(DMSO)购于美国Sigma公司;RPMI 1640培养基、F-12K培养基、胎牛血清(FBS)、青链霉素、胰蛋白酶为美国Gibco公司产品。

QuixStand膜过滤分离系统以及AKTA Explorer 100快速蛋白质纯化系统(FPLC)，瑞典GE Healthcare;Mini-电泳系统，北京六一仪器厂;Elx800酶标仪，美国Bio Tek;Du650紫外/可见分光光度计，美国Beckman公司。

1.2 中华真地鳖蛋白粗提物的制备

取洗净的昆虫材料加入2 L/kg预冷的生理盐水进行组织匀浆，4℃浸提过夜，脱脂棉过滤，4℃条件下10 000 r/min离心15 min，小心刮去上层油脂，弃沉淀。……