张海峰，张 颖，任青爱，谢晓华

（解放军总医院 南楼外一科，北京 100853）

当机体受到严重创伤、手术、休克等打击时，会产生一系列应激反应，导致机体损伤，肺脏、心脏等远隔脏器的损害常较为严重。研究发现[1]：大鼠截肢创伤可造成肺损伤，术后6h肺损伤最重。研究已证实：缺血缺氧是导致各种脏器损害的主要始动因素之一，线粒体损害是缺血缺氧损害的关键环节，创伤引起的缺血缺氧等原因导致线粒体结构和功能的损伤可能是创伤后肺脏等远隔脏器损害的重要环节。本实验旨在研究截肢创伤后大鼠肺组织细胞内线粒体结构与功能的损伤情况及他克莫司（tacrolimus，FK506）对其的干预及作用机制。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

生物氧耗分析系统（Strathkelvin，英国）、多功能酶标仪 SynergyHT（Bio-TEK，美国）；荧光分光光度计 Hitachi-2500（日立，日本）；Bradford蛋白浓度测定试剂盒 （碧云天生物技术研究所）；总ATP酶活力测定试剂盒 （南京建成生物工程研究所）；Rhodamine 123、ADP（Sigma，美国）。

1.2 实验动物及分组

健康成年雄性SD大鼠24只，体重260～300g，购自第三军医大学实验动物中心，常规条件下标准饲料喂养。随机分为3组（n=8）。对照组：腹腔注射与干预组等体积的生理盐水，6h后麻醉迅速处死；创伤组：以截肢创伤应激后6h大鼠作为创伤对照，创伤后立即腹腔注射与干预组等体积的生理盐水，截肢术后6h迅速处死；干预组：截肢后立即腹腔注射FK506 0.1mg/kg[2]，截肢术后6h迅速处死。

1.3 动物模型制作及标本采集

3%异戊巴比妥钠（80mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定。先于左侧腹股沟处切开皮肤，游离出股动静脉，结扎腹壁浅动静脉及其他分支，于膝关节上方1.2～1.4cm处完全切断除股静、动脉以外的所有结构，缝扎止血，最后剪断股静、动脉，建立大鼠左后肢的截肢创伤应激模型。……