提金凤，李志杰，李 舫

（山东畜牧兽医职业学院，山东 潍坊 261061）

鸭病毒性肝炎（Duck viral hepatitis，DVH）是由鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）引起的一种传播快速、急性高度致死性传染病，主要侵害1月龄以内的雏鸭。该病于1949年由Levine和Hofstad首次发现于美国的长岛，呈世界性分布，是危害养鸭业最为严重的传染病之一[1]。鸭病毒性肝炎的病原为DHV，可分为3个血清型，分别为Ⅰ型DHV、Ⅱ型DHV和Ⅲ型DHV[1－2]。DHV属于小RNA病毒科，病毒粒子呈正二十面体结构，其组成为衣壳蛋白和一条由衣壳蛋白包裹的长约7.7kb左右的单链正股RNA组成。Ⅰ型DHV流行最广泛且致病力最强，Ⅱ型DHV仅见于英国，Ⅲ型DHV 仅见于美国和中国，均呈偶发性[3－4]。

近年来，国内外也相继有关新型DHV （NDHV）的报道，但Ⅰ型DHV仍是发病的主要血清型。传统上对该病的治疗是采用卵黄抗体，但有时受卵黄抗体中非特异性蛋白或抗体滴度过低的影响，治疗效果较差。针对这种情况，本文从山东地区分离出一株Ⅰ型DHV并进行鉴定，然后对其进行单克隆抗体的研制，筛选出具有中和性的单克隆抗体，为以后进一步用单抗来进行该病的临床诊断和治疗提供方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 鸡胚、细胞系及实验动物 SPF鸡胚购自山东省农科院家禽研究所；6周龄的Balb／c小鼠以及8周龄～10周龄的昆明鼠购自山东大学医学院；小鼠骨髓瘤细胞SP2／0－Ag14由中国动物卫生与流行病学中心邵卫星博士馈赠。

1.1.2 主要试剂 PEG4000、高糖型 DMEM、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、L－谷氨酰胺、单克隆抗体亚类鉴定试剂盒、邻苯二胺（OPD）、辣根过氧化物酶（HRP）为Sigma公司产品；羊抗鼠IgG－HRP、羊抗鼠IgGM－HRP为华美公司产品；……