整合素干扰载体的构建及细胞转染试验
2012-06-29李维维张彦明
动物医学进展 2012年2期
李维维,张彦明,王 刚,程 敏,陈 婷
(西北农林科技大学动物医学院,陕西 杨凌 712100)
整合素(integrin)是一种由α、β两个亚单位组成的异源双聚体跨膜蛋白,能传递跨膜信息、调节细胞功能,在细胞黏附和增殖中起重要作用。整合素αvβ3是一类表达于细胞表面的跨膜糖蛋白黏附分子,由α和β两种Ⅰ型膜蛋白亚单位以非共价键形式连接形成异源二聚体分子。整合素αvβ3在血管生成、胚胎发育、肿瘤转移、免疫应答等多种生理和病理过程中发挥着重要的作用[1-3]。αvβ3特异性识别配体的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽序列,介导细胞与细胞、细胞与细胞质基质(ECM)之间的相互作用,发挥其黏附和信号转导两大基本功能。
试验证明,整合素αvβ3是多种病毒的细胞表面结合位点。例如,Gavrilovskaya IN等研究表明整合素β3可促进汉坦病毒致病毒株感染宿主细胞,并且与汉坦病毒所致疾病的血管通透性改变及血小板功能异常等致病机制有关[4-5]。Berinstein A等发现整合素是口蹄疫病毒的受体[6-8]。人双埃可病毒、轮状病毒、人免疫缺陷病毒等均可通过αvβ3介导进入细胞。但是整合素β3在猪瘟病毒感染中的作用一直鲜有研究,本研究通过RNA干扰的方法建立整合素β3的干扰载体并转染猪血管内皮细胞,为进一步研究猪整合素β3在猪瘟病毒致病机理方面奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株和细胞 E.coli DH5α菌株、猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),由西北农林科技大学动物医学院畜禽疫病防治与畜产品安全实验室保存。
1.1.2 主要试剂 MEM 培养基,GIBCOTM,Invitrogen公司产品;胎牛血清(FBS),Hyclone公司产品;……
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