猪日本脑炎病毒NS3蛋白的基因克隆、原核表达及纯化*
2012-06-29韩秀杰张保新赵凡凡余风艳沈红霞王晓杜
韩秀杰,张保新,赵凡凡,余风艳,沈红霞,王晓杜
(浙江农林大学动物科技学院,浙江 临安 311300)
日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),又称乙型脑炎病毒,属于黄病毒科黄病毒属单股正链RNA病毒,它可引起以中枢神经系统损害为主的虫媒性人畜共患病,即日本脑炎或乙型脑炎[1]。每年在全球有30000~50000个乙型脑炎病例,其中超过10000人死亡,乙型脑炎广泛分布于东南亚各地区,而我国是乙型脑炎发病人数最多的国家之一,占世界总发病数的80%以上[2],幸存者约有一半留有严重的神经和精神后遗症。而在动物中猪是JEV的主要感染对象和寄存宿主,种猪感染JEV后表现为繁殖机能障碍,母猪表现为产死胎、木乃伊胎等。该病的发生既严重影响养猪业的健康发展,同时也对公共卫生具有重要的影响。
JEV的基因组为单股、正链RNA分子,其长度约为11kb(10976bp),裸露的病毒RNA有感染性。在宿主和病毒蛋白酶的切割下,JEV产生3种结构蛋白,即C蛋白(壳/核心蛋白)、PrM/M(膜前体蛋白/膜蛋白)和E蛋白(囊膜糖蛋白)以及7种非结构白,即 NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5[3]。自从该病毒产生以来,进化出5种基因型,逐渐遍布整个亚洲[4]。
JEV NS3基因全长约1850bp,编码蛋白的分子质量为64ku。它是一个具有丝氨酸蛋白酶、螺旋酶、核苷酸5′磷酸酶的活性蛋白质,在病毒前体蛋白剪切和基因组RNA复制中具有重要作用[5]。有研究表明NS2B-NS3蛋白酶复合物的形成,有利于C-prM前体的剪切加工,并使C和prM分泌增加[6]。在JEV感染细胞中,NS3与微管和肿瘤敏感基因101蛋白密切相关,在病毒的RNA装配、病毒成分胞内运输以及病毒的装配中发挥重要作用[7-9]。……
