韩慧平，于三科

（西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100）

巨细胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）感染在人及动物中普遍存在，不同的物种具有其特定的病毒株，我国人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）感染率高达86%～96%[1]。HCMV感染对胎儿和免疫功能低下者危害严重[2－3]，而且与动脉粥样硬化和肿瘤发生密切相关[4]。研制HCMV疫苗对预防该病毒感染具有非常重要的意义[5]。HC－MV表面的包膜糖蛋白B（glycoprotein B，gB）全长906个氨基酸，介导病毒与宿主细胞的黏附和融合，是HCMV自然感染中诱生中和抗体的主要保护性抗原，因此也是HCMV疫苗研究的主要靶抗原[6]。本实验室在前期研究基础上构建了两个含有gB中和表位区域的重组蛋白gB1和gB2，以作为HCMV疫苗的候选抗原。为了对这两个候选疫苗抗原进行定性和定量分析，需要获得相应的高效价免疫血清。根据文献报道[7]，gB分子57aa～146aa片段为介导病毒入侵细胞的关键位点，本研究利用原核表达系统表达了gB（57aa～146aa）蛋白，采用了一种快速简便的高效价小鼠免疫血清制备方法，5周内通过2次免疫即可制备获得高滴度的抗gB（57aa～146aa）多克隆抗体，为进一步研究以gB为基础的HCMV疫苗提供研究工具。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级Balb／c小鼠6只，雌性，6周龄～8周龄，购自中国医学科学院实验动物中心。

1.1.2 主要试剂 TOP10和 Rosetta（DE3）感受态细胞为北京博迈德科技发展有限公司产品；pET21b（＋）和pMD－18T－gB （aa 1－907）质粒由本室保存；质粒小量提取试剂盒和琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒为Axygen公司产品；Primer STAR HS DNA聚合酶、T4DNA连接酶和限制性内切酶为宝生物工程（大连）有限公司产品；HRP标记的兔抗小鼠IgG为 USB公司产品；……