鸡IFN-γ基因重组蛋白复性条件的优化及生物活性鉴定
2012-06-29刘鼎阔王立红徐大为杨爱华王建春
刘鼎阔,王立红,徐大为,杨爱华,王建春,秦 操,张 勇*
(1.鼎正动物药业(天津)有限公司,天津 300402;2.天津农学院,天津 300402;3.天津市动物疫病预防与控制中心,天津 300402;4.新乡市红旗区职业高级中学,河南 新乡 453200)
IFN-γ属于Ⅱ型干扰素,又称免疫干扰素,是在特定诱生剂的作用下由多种细胞产生的具有高度生物活性的可溶性糖蛋白,是一种重要的细胞因子[1]。IFN-γ在抵抗哺乳类和鸟类病原侵染中具有重要的作用,对肿瘤[2]、细菌[3]、病毒[4]以及寄生虫[5]等具有多重抵抗作用。目前研究已证实鸡IFN-γ对流感病毒、新城疫病毒[6]、马立克病病毒[7-9]及鸡劳氏肉瘤病毒[10]等具有较好的抑制作用,它不仅参与机体对病原侵害的保护性应答,还可通过细胞的信号通路广泛参与包括调节机体主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)成熟、抗原递呈等在内的免疫调节,是机体内重要的免疫增强剂[11]。
鸡的IFN-γ基因由4个外显子和3个内含子组成,其开放性阅读框有495个碱基,编码19个氨基酸的信号肽和145个氨基酸的成熟蛋白,其成熟蛋白大小约为18ku。本实验室从依莎褐鸡中克隆获得 的 cIFN-γ (GenBank accession number:AY705909),并成功的利用大肠埃希菌表达出具有生物活性的鸡IFN-γ[12]。但由于鸡IFN-γ在大肠埃希菌中表达效率过高,其表达产物主要以无活性的包涵体形式存在,须对包涵体进行变性、复性等后续处理工作,以获得具有生物学效应的重组表达产物。不同的重组蛋白的复性条件有非常大的差异,复性效率显著不同,这些严重制约鸡IFN-γ的工业化生产。因此,我们对蛋白质复性条件进行优化,力求找到一种简单、价格低廉、复性得率和效率较高的方法,为鸡IFN-γ的工业化生产奠定基础。……
