浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所 许少春 李艳丽 柳 永 许尧兴＊

研究表明，饲料中添加复合酶制剂的饲喂效果优于单一酶制剂（李吉祥等，2007）。然而现在的复合酶一般是由单一酶复配而来的，应用成本较高。因此，研究复合酶的高效生产方法势在必行。本文在前期筛选获得高产α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的单一黑曲霉菌株的基础上，进一步对混合菌进行固态发酵条件研究，为复合酶制剂的高效产业化生产提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 菌种与培养基 黑曲霉变种（A.niger v.Tiegh CGMCC1182）为 α-半乳糖苷酶（α）生产菌株，酶活力可达245 IU/g（许尧兴等，2009）；黑曲霉MA-56（A.niger MA-56 CGMCC2722）为 β-甘露聚糖酶（β）生产菌株，酶活力可达1101 IU/g（李艳丽等，2009）；黑曲霉 XY-1（A.niger XY-1 CGMCC1182）为木聚糖酶（X）生产菌株，酶活力可达9478 IU/g（Xu 等，2008）。

斜面保藏培养基（PDA）：马铃薯 200 g/L，蔗糖20 g/L，琼脂20 g/L，自然pH。

混菌发酵基础培养基（M-M），根据三种酶单一生产的培养基配方进行组合确定：麸皮8 g，豆粕 2 g，玉米芯 2 g，魔芋粉 0.1 g，葡萄糖 0.5 g，（NH4）2SO40.2 g，NaNO30.2 g，MgSO40.1g，KH2PO40.2 g，H2O 11 mL。进行营养因子条件试验时，各成分的含量根据实际情况确定。

1.2 培养条件 将在PDA斜面上生长4～5 d的三种酶制剂的黑曲霉菌株的孢子用30 mL无菌水洗脱，并按1∶1∶1的比例制成混合孢子悬浮液。吸取2 mL孢子悬浮液至装有11 g（按干基质）发酵培养基的300 mL三角瓶中，并搅拌均匀。28～30℃培养56 h。

1.3 酶活测定

1.3.1 粗酶液制备 将发酵后的培养物于40℃烘干，粉碎。称取一定量的固体酶样，加入适量的水，40℃水浴抽提30 min，用滤纸过滤，滤液即为粗酶液。依据发酵产物中α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的酶活高低，粗酶液再作适当的二次稀释供测定。……