张 辉 焦海宏 陈 伟，*

乳房链球菌(Streptococcus uberis)作为引起奶牛乳房炎(mastitis)的主要致病菌之一，致病性与多种毒力因子相关。其中乳房链球菌gapC基因编码的具有3－磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde－3－phosphate dehydrogenase，GAPDH)活性的一种表位蛋白，即GapC蛋白，是近年来研究较多的一种毒力蛋白，也被认为是一种与毒力相关的免疫调节蛋白［1］。GapC蛋白能与血纤维蛋白溶酶结合，在疾病发展过程和信号转导过程中起着重要作用，可作为疫苗发展的良好靶位点［2，3］。因此，研究GapC蛋白的功能可为乳房链球菌抗原的筛选、疫苗的研制和奶牛乳房炎的防治提供一定的理论指导。

本研究通过PCR方法扩增乳房链球菌临床分离株的gapC基因，应用基因重组技术，构建乳房链球菌gapC基因原核表达载体 pET－32a(+)－gapC，并进行GapC蛋白的诱导表达，获得GapC蛋白最佳诱导表达条件，为后续应用该蛋白进行免疫学研究，确定其免疫原性及免疫保护作用奠定基础。

1 材料和方法

1.1 实验仪器

PCR仪(Bio－Rad)，恒温培养箱(Boxun，上海)，移液器(Eppendorf)等。恒温水浴锅(金坛市医疗器械厂)，金属浴(金银杏生物科技，北京)，凝胶成像系统(Bio－Rad)，蛋白电泳仪(北京六一仪器厂)，高速台式离心机(Eppendorf)。

1.2 实验药品与试剂

限制性内切酶E coRⅠ、X hoⅠ、T4 DNA连接酶、IPTG、氨苄青霉素(AMP)、DNA分子量标准(DL2 000，DL10 000)与表达载体pET－32a(+)均购自TaKaRa宝生物工程(大连)有限公司;Taq DNA聚合酶、dNTPs等PCR试剂购自东盛生物有限公司;质粒小提试剂盒、普通DNA产物纯化试剂盒购自北京天根生物有限公司;蛋白质分子量标准、TEMED、考马斯亮蓝、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、DTT均购自Ameresco公司;其它试剂均为国产分析纯或试剂纯;BHI培养基(Becton Dickinson)。……