范平明，郑武平，高炳玉

(海南医学院附属医院，海口570102)

Polo样激酶1(PLK1)是一类广泛存在于真核细胞中呈周期依赖性表达的丝/苏氨酸激酶，与肿瘤的发生、发展密切相关。2006年6月～2012年3月，我们观察了食管鳞癌组织中PLK1的表达变化，及其对食管癌细胞侵袭转移能力的影响，并初步探讨了其可能的机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 食管鳞癌80例，男61例，女19例;年龄25～77岁，平均45岁;术前未行放化疗。于2006年6月～2008年6月行食管癌手术，术中留取肿瘤及癌旁正常组织标本，TNM分期T1～T2期56例，T3～T4期24例;临床分期Ⅰ～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ期40例;病理分级G0～G1级39例，G2～G3级41例;有淋巴结转移48例，无淋巴结转移32例。术后患者均进行化疗、放疗等规范性治疗，随访至2012年3月31日。

1.2 方法

1.2.1 食管鳞癌组织中PLK1的检测 采用免疫组化SP法。组织标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚4 μm;SP染色，抗原修复采用柠檬酸钠缓冲液微波修复;以已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。PLK1阳性细胞为细胞核深褐色染色。高倍镜下选择5个视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，计算阳性细胞所占百分比。阳性细胞百分比＜10%为阴性，≥10%为阳性。

1.2.2 细胞培养与转染 将人食管癌EC9706细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。将细胞以6×105/mL接种于6孔板，每孔1 mL;培养16 h后，观察组用PLK1 siRNA(5'-GGGACATAGCCAAGCTGGTCGAGTACTGGACCAGCTT-GGCTATGTCCC-3'，由Invitrogen公司合成)经脂质体转染EC9706细胞，对照组细胞转染Scrambled siRNA(与人类基因组序列无同源性，由Invitrogen公司合成);继续培养48 h后，将细胞按1∶10传代，然后加入G418进行筛选;每隔2～3 d换液1次，10～14 d有明显克隆形成。

1.2.3 食管癌细胞侵袭及迁移能力的观察 采用Transwell试验。……