陈北冬 沈恂 齐若梅

动脉粥样硬化是一种以血脂紊乱作为病理基础，并伴有血管细胞氧化应激的慢性炎症性疾病。单核细胞趋化蛋白1(monocytechemotactic protein-1，MCP-1)参与白细胞的招募，是动脉粥样硬化重要的始动因子，在动脉粥样硬化的发生发展中起到重要的作用［1-2］。

绿茶的主要有益成分是茶多酚(tea polyphenols)，大量实验证明茶多酚具有抗氧化、抗脂质过氧化、清除自由基、抗突变和抗肿瘤形成等药理效应。但是其对动脉粥样硬化影响的研究还很少，尤其是有关茶多酚对血管内皮细胞分泌MCP-1的调节作用尚未见报道。本研究观察了茶多酚对血管内皮细胞炎症蛋白MCP-1的影响，并以水溶性的维生素E(Trolox)和银杏标准提取物(EGb761)为抗氧化剂对照，评价茶多酚对内皮细胞氧化损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 内皮细胞 人脐静脉内皮细胞系EA.hy926，由University of North Carolina的C.J.Edgell教授馈赠。由原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与人肺Ⅱ型上皮细胞系(A549)杂交而成。

1.1.2 药物与试剂 茶多酚为中国科学院生物物理研究所脑与认知国家重点实验室提供，为色谱纯。Trolox及MTT购自美国Sigma公司。EGb761购自德国威玛舒培博士药厂。鼠抗人单抗及生物素标记羊抗人MCP-1单抗，购自美国R＆D Systems公司。重组人 MCP-1标准品购自英国 Peprotech公司。pMCP-1全长报告基因质粒由Dr.Remick(Department of Pathology，University of Michigan Medical School)馈赠。转染试剂VigoFect购自威格拉斯生物技术(北京)公司。

1.1.3 仪器 奥林巴斯显微镜;美国芬兰雷勃MK3酶标仪;Glo MaxTM96微孔板发光检测仪。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与处理 EA.hy926细胞用含有2 mmol/L谷氨酰胺、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素和10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2的培养箱中培养。于实验前24 h，将细胞计数后，接种到6孔培养板或24孔板中培养，加药前用无血清的DMEM洗细胞2次，氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激前用含有0.2%血清的DMEM饥饿细胞12～24 h。……