廖志雄 沈建根 楼正青

(1.杭州市中医院,浙江 杭州 310007;2.浙江大学医学院,浙江 杭州 310031)

人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)是存在于骨髓中具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞群体,在组织工程、细胞移植等领域中应用前景十分广阔,目前已成为干细胞研究领域的一个热点[1]。迄今,国内外还没有类似于CD34识别造血干细胞一样的标记物用于鉴定hMSCs[2]。为了探索分离和鉴定hMSCs的新途径,作者以多供体hMSCs为抗原,制备了4株抗hMSCs单克隆抗体,并对其生特学特性进行了研究。本文将对所制单抗与SH2(进口单抗)在hMSCs的检测与分选等各方面进行比较,探讨所制单抗的应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料 自制抗hMSCs单抗杂交瘤细胞株ZUB1、ZUB4、ZUC3、ZUF10,亲和层 析柱及 SPA-sepharose CL-4B凝胶(Pharmacia公司),流式细胞仪(Becton Dickinson公司),SH2杂交瘤细胞株(ATCC 公司,美国,编号:HB10743),组织标本(肌肉 、骨髓、神经 、胆囊 、皮肤、肝、肺 、包 皮、肌腱 、脂肪、韧带、动脉)由浙江大学医学院血液学研究所提供,RPMI-1640为日本制药株式会社产品,Ficollpaque分离液购自上海试剂二厂,胎牛血清、LGDMEM培养液购自GIBCO BRL公司,羊抗小鼠IgG+IgM-FITC为ALTAG公司产品,辣根过氧化物酶(Strepavidin-HRP)免疫组化染色超敏试剂盒为福州迈新生物技术开发公司产品,小牛血清(超级)购自杭州四季青生物工程材料研究所,羊抗小鼠IgG磁珠二抗购自Miltenyi Biotec公司。

1.2 方法

1.2.1 抗hMSCs单抗的制备与纯化 以多供体hMSCs免疫BALB/C小鼠,制得4株抗hMSCs单抗(分别命名为 ZUB1、ZUB4、ZUC3、ZUF10),将 4 株单抗杂交瘤细胞及SH2杂交瘤细胞复苏扩增后,接种至液体石蜡预处理过的BALB/C小鼠腹腔,10～15天后收集腹水,所得腹水经盐析后以离子交换柱纯化或亲和层析纯化[3]。……