曹志友，欧阳瑾，金 宏，温 娜，王新成，王 爽＊

（1.吉林医药学院直属医院，吉林 吉林132013；2.吉林医药学院 实验中心）

本研究以Lewis肺癌细胞为对象，对白桃汤剂的抗肿瘤作用进行初步研究，为该药应用于临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠Lewis肺癌细胞（购于中科院上海细胞库）。白桃汤剂（吉林医药学院制备，含核桃皮15g，白附子15g，甘草10g，黄芪20g等），按常规方法制成1g／ml备用。环磷酰胺（上海生化制剂厂）。小牛血清、DMEM 培养基、胰酶（GIBCO公司），CO2恒温孵箱（Thermo Electron公司），倒置显微镜（Olympus公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 复苏小鼠Lewis肺癌细胞，用含10%血清的DMEM培养液，置于培养箱中，37℃，5%CO2，饱和湿度下培养，隔日换液，1∶3传代。

1.2.2 酶联免疫吸附（ELISA）法测定培养上清液中Bcl－2、P53蛋白含量将Lewis细胞制成单细胞悬液，以1×105个／孔细胞接种于6孔板中，培养24 h，将细胞分为3组，分别加入白桃汤剂40mg／ml、环磷酰胺（CTX）10μg／ml，对照组用基础培养基。作用24h、48h留上清，将包被液4∶1稀释后加入96孔酶标板中（空白对照组为100%包被液）4℃过夜；37℃封闭2h。兔抗鼠多克隆Bcl－2、P53抗体（武汉博士德生物工程有限公司）一抗37℃孵育2 h，HRP标记的二抗37℃孵育2h，显色液室温避光10min；有颜色变化时终止反应，酶联免疫检测仪492nm处测定吸光度值（Å）。用空白对照组调零。

1.3 统计学分析 实验数据以均数加减标准差x—±s表示。组间比较用t检验。

2 结果

2.1 白桃汤剂对小鼠Lewis肺癌细胞的抗肿瘤作用

小鼠Lewis肺癌细胞经白桃汤剂作用后，检测其培养上清中Bcl－2和P53表达，发现上清中Bcl－2蛋白含量在两个时间点均有明显降低，有统计学意义（P＜0.05），并随时间延长作用更加明显。与环磷酰胺组对比，白桃汤剂作用后抑制Bcl－2蛋白表达更显著。……