曹志友，欧阳瑾，金 宏，温 娜，王新成，王 爽＊

（1.吉林医药学院直属医院，吉林 吉林132013；2.吉林医药学院 实验中心）

本研究以Lewis肺癌细胞为对象，对白桃汤剂的抗肿瘤作用进行初步研究，为该药应用于临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠Lewis肺癌细胞（购于中科院上海细胞库）。白桃汤剂（吉林医药学院制备，含核桃皮15g，白附子15g，甘草10g，黄芪20g等），按常规方法制成1g／ml备用。环磷酰胺（上海生化制剂厂）。小牛血清、DMEM 培养基、胰酶（GIBCO公司），CO2恒温孵箱（Thermo Electron公司），倒置显微镜（Olympus公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 复苏小鼠Lewis肺癌细胞，用含10%血清的DMEM培养液，置于培养箱中，37℃，5%CO2，饱和湿度下培养，隔日换液，1∶3传代。

1.2.2 酶联免疫吸附（ELISA）法测定培养上清液中Bcl－2、P53蛋白含量将Lewis细胞制成单细胞悬液，以1×105个／孔细胞接种于6孔板中，培养24 h，将细胞分为3组，分别加入白桃汤剂40mg／ml、环磷酰胺（CTX）10μg／ml，对照组用基础培养基。作用24h、48h留上清，将包被液4∶1稀释后加入96孔酶标板中（空白对照组为100%包被液）4℃过夜；37℃封闭2h。兔抗鼠多克隆Bcl－2、P53抗体（武汉博士德生物工程有限公司）一抗37℃孵育2 h，HRP标记的二抗37℃孵育2h，显色液室温避光10min；有颜色变化时终止反应，酶联免疫检测仪492nm处测定吸光度值（Å）。用空白对照组调零。

1.3 统计学分析 实验数据以均数加减标准差x—±s表示。组间比较用t检验。

2 结果

2.1 白桃汤剂对小鼠Lewis肺癌细胞的抗肿瘤作用

小鼠Lewis肺癌细胞经白桃汤剂作用后，检测其培养上清中Bcl－2和P53表达，发现上清中Bcl－2蛋白含量在两个时间点均有明显降低，有统计学意义（P＜0.05），并随时间延长作用更加明显。与环磷酰胺组对比，白桃汤剂作用后抑制Bcl－2蛋白表达更显著。而P53蛋白在作用48h后下降有统计学意义（P＜0.05），见表1、2。

表1 白桃汤剂作用于小鼠Lewis肺癌细胞上清中Bcl－2表达水平检测（x—±s）

表2 白桃汤剂作用于小鼠Lewis肺癌细胞上清中P53表达水平检测（x—±s）

3 讨论

随着中药的发展，中药治疗肿瘤也开始投入更多的财力和物力。民间秘方白桃汤剂对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤生成具有明显的抑瘤作用，药物作用于动物后可引起血清TNF－α水平升高、IL－6水平降低，进而提高机体的免疫功能［1］。白桃汤剂也可以通过降低移植瘤VEGF的表达率，抑制小鼠肺癌血管生成从而抑制肿瘤生长和转移来发挥其抗肿瘤作用［2］。本实验在以往研究的基础上，对白桃汤剂的抗肿瘤作用机制作进一步研究，以明确其抗肿瘤机制。

我们对小鼠Lewis肺癌细胞进行培养，用ELISA方法对白桃汤剂作用细胞后上清进行检测，结果发现：小鼠Lewis肺癌细胞经白桃汤剂作用后，其培养上清中Bcl－2蛋白含量在两个时间点均有明显降低，并随时间延长作用更加明显。而P53蛋白在作用48h后也下降，与环磷酰胺组对比，白桃汤剂作用后抑制Bcl－2、P53蛋白表达更显著。诱导肿瘤细胞发生凋亡在肿瘤多种治疗方法中占有重要的地位，Bcl－2、P53等均参与了细胞凋亡的调控［3］，在肺癌的发生、发展过程中起到了重要的作用［4］。而其它抗癌物质如海藻硫酸多糖对肺癌增殖的抑制作用可能是通过Bcl－2、P53等均参与了细胞凋亡的调控而发挥作用［5］。因此，通过实验我们初步验证了白桃汤剂可能是通过Bcl－2、P53等调控肿瘤的生长，但其具体作用机制还需进一步研究。

［1］曹志友，王 爽，欧阳瑾，等.白桃汤剂治疗Lewis肺癌小鼠的实验研究［J］.时珍国医国药，2009，20（4）：914.

［2］欧阳瑾，曹志友，王 爽，等.白桃汤剂抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究［J］.时珍国医国药，2009，20（10）：2476.

［3］Rom WN，Hay JY，Lee TC，et al.Molecular and genetic aspects of lung cancer［J］.AmJ Respir Crit Care Med，2000，161：1355.

［4］张晨策，魏煜程，沈 毅.非小细胞肺癌组织P53、P16和Bcl－2蛋白表达及意义［J］.齐鲁医学杂志，2011，26（4）：302.

［5］翟振国，蒋捍东，秦筱梅，等.海藻硫酸多糖对肺癌增殖的抑制作用及其机制［J］.中华结核和呼吸杂志，2004，27（2）：97.