陈丽萍，薛红，李景姝，窦林松，李彤

(1．沈阳医学院沈洲医院呼吸内科，辽宁 沈阳 110002；2．沈阳市胸科医院呼吸内科)

支气管哮喘(简称哮喘)其发病机制复杂，现已发现不同的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)等位基因在哮喘的发病中起抑制作用或为哮喘的易感基因。HLA-Ⅱ类基因在复合体中位于近着丝点一端，命名为HLA-D，其结构最为复杂，至少分为DP、DQ和DR三个亚区。本实验采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)技术检测辽宁沈阳地区汉族人HLA-DPB1等位基因频率，从免疫遗传学角度探讨支气管哮喘与HLA-DPB基因相关性，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 研究对象及分组 2009年6月至2011年5月收治于我院呼吸内科的支气管哮喘患者100例，均为轻、中度哮喘患者[1]，男46例，女54例，年龄(50.5±6.2)岁，所有受试者均无茶碱、糖皮质激素治疗史，静脉抽血，酶联免疫法检测血总IgE明显增高。100例健康体检对照者，男48例，女52例，年龄(48.6±5.7)岁，所有受试者均无吸烟史，近4周内无上呼吸道感染史。各组年龄、性别构成比差异无统计学意义(P>0.05)。所有入选者均为汉族，长期生活在沈阳地区(3代或以上)，并除外免疫系统疾病等HLA相关疾病及家族史。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 Tris、硼酸、EDTA-Na2、SDS(上海试剂厂)；蛋白酶K、DL 1 000 bp Marker、Taq DNA聚合酶、10×Buffer、dNTP (TaKaRa公司)；琼脂糖、genefinder(华美生物工程公司)。

1.2.2 主要仪器 DNA扩增仪(Biometra，T-gradient)；电泳仪(Pharmacia，ESP 500/400)；电泳槽(北京六一仪器厂，DYY-III33A)； 紫外分光光度计(Unico，2800)；高速台式离心机(上海医用分析仪器厂，TGL-16G)；低温冰箱(新飞，BC/BD-625)；恒温水浴槽(北京六一仪器厂，SY-1220)；紫外凝胶成像分析系统(White/Ultraviolet Trasilliominator，OLYMPIA)。

1.2.3 外周血基因组DNA提取 抽取外周静脉血0.5 ml，2%EDTA 100 nl抗凝，传统酚-氯仿法提取基因组DNA。用……