田力，梁晓鹏，田晓晔，于鑫琛，田晶

(1.沈阳医学院临床教研室，辽宁 沈阳 110034；2.眼视光学院；3.铁岭经济开发区靖康康复养老中心；4.沈阳靖康医疗集团)

建立理想的股骨头缺血坏死动物模型，是研究股骨头缺血坏死病因及发病机制十分重要的手段，也是进行股骨头缺血坏死治疗研究的基础[1]。股骨头缺血坏死动物模型的造模方法文献已经有很多报道，目前兔股骨头坏死模型的激素诱导制作方法主要包括连续两次注射脂多糖(100 μg/kg)[2]，单剂量静脉注射脂多糖(10 μg/kg)[3]，连续多次肌注皮质类固醇(4 mg/kg)[4]，大剂量脂多糖联合大剂量的皮质类固醇，但尚没有一种能够快速、高效、低死亡率以及更加接近人早期股骨头缺血坏死的动物模型。我们在总结前人成功经验的基础上，旨在建立一个能够真正模拟人早期股骨头缺血坏死的动物模型，使用小剂量脂多糖(10 μg/kg)联合大剂量的地塞米松(25mg/kg)诱导兔股骨头坏死，通过免疫组化和实时定量荧光PCR技术研究了不同时间点兔坏死股骨头内VEGF和Bcl-2基因表达的动态变化。

1 材料和方法

1.1 主要仪器及药品试剂 引物(大连宝生生物工程有限公司)；Trizol Reagent(Invitrogen公司)；DEPC(Sigma公司)；宝生物rTaq酶及配套试剂；ABI9700型PCR扩增仪；台式低温高速离心机( Heraeus instruments，德国)；稳压稳流定时电泳仪(BIO-RAD，美国)；水平电泳槽(BIO-RAD，美国)；紫外分光光度计(BIO-RAD，美国)；Opticon荧光定量PCR仪(美国MJ Research公司)；SP免疫组织化学试剂盒(Sigma公司)；寡核苷酸探针杂交试剂盒(武汉博士德公司)；DNaseI(RNase Free，5 U/μl，大连宝生生物工程有限公司)；RNase Inhibitor(40 U/μl，美国Promega公司)；10×Buffer RT(德国Qiagen公司)；dNTP(5 mM，德国Qiagen公司)；Qmmiscript RT(40 U/μl，德国Qiagen公司)；……