陶 玉 吉志固 刘玉山 陆晓云 周建云 陈亚丽 何 松

在肺癌的临床诊治工作中，我们常常遇到许多患者就诊时的首发症状为胸腔积液或心包积液，这时的临床分期已属ⅢB或Ⅳ期，即肺癌晚期。对其胸腔积液或心包积液查找恶性肿瘤细胞并分型诊断，可能成为这部分患者获得病理学依据的唯一方法。目前对非小细胞肺癌(non-small cell lung cance，NSCLC)的标准化疗，主张以ERCC1、RRM1、β-tubulinⅢ等基因检测结果为指导的个体化治疗。我们采用液基细胞学检测技术(liquid based cytology test，LCT)，对71例胸腔积液或心包积液标本在作出细胞学诊断的同时进行了ERCC1、RRM1、β-tubulinⅢ等基因检测，旨在为晚期NSCLC的个体化治疗提供实验依据。现将我们的实验结果总结如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集我院2009年2月～2011年12月的胸腔积液或心包积液标本，共获得晚期NSCLC 71例，所有标本必须满足以下条件:①液基细胞薄片经HE染色后由2位资深细胞学医师共同阅片并一致诊断为NSCLC;②HE染色的液基细胞片内可见较多癌细胞;③有足够的剩余标本可供免疫细胞化学检查。71例晚期NSCLC中腺癌69例，鳞癌1例，腺鳞癌1例。男性患者40例，女性31例;年龄39～86岁，平均年龄62.3岁。

1.2 设备及试剂

1.2.1 液基细胞薄片制作仪器与试剂 程控离心机 Hettich 46，超柏 Auto Cyte PREP液基细胞薄片自动制片机(美国Tripath ImaginInc)及随机配置的一次性耗材:12 m l离心管、移液Tip头、细胞沉降管、玻片、红色固定液。自配耗材:50 ml离心管、Tris缓冲粉、苏木精、伊红、无水乙醇。

1.2.2 免疫细胞化学染色仪器和试剂 免疫组化全自动染色机(美国 LAB VISION，AUTO STAINER 720)，单克隆一抗 ERCC1(NeoMarker公司，1∶350)、RRM1(ProteintechGroup，1∶500)、β-tubulinⅢ(BioGenex公司，1∶1000);ERCC1免疫染色所用二抗为PV-9000 Anti-Mouse/Rabbit(北京中杉生物技术有限公司)，RRM1及β-tubulinⅢ免疫染色所用二抗为EnVision Anti-Mouse/Rabbit(Dako公司)。……