郭彩霞 梁晓秋 何晓娟

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位。胃癌的早期发现早期治疗尤为重要。1985年美国Missouri大学Smith等［1］创立了噬菌体展示技术。本文应用体内噬菌体展示技术，筛选与人胃癌组织特异性结合的短肽，以指导临床胃癌的早期诊断和靶向治疗，提高药物靶向的特异性，实现治疗的针对性和安全性［2］。

1 材料与方法

1.1 材料

细胞株:人胃癌细胞株SGC-7901为本室保存。实验动物:BALB/C裸小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司。噬菌体肽库:噬菌体环7肽文库试剂盒 (Ph.D.-C7CTm Phage Display Peptide Library Kit);HRP标记的抗噬菌体单克隆抗体鼠抗M13噬菌体抗体为美国Pharmacia公司产品。M13噬菌体单链DNA快速提取试剂盒为美国QIAGEN公司产品。

1.2 裸鼠体内噬菌体的筛选

尾静脉注射噬菌体随机环7肽文库2×1011pfu/只(将其溶于RPMI-1640溶液中)，15 min后10%水合氯醛麻醉(0.03 ml/10 g)，通过心脏灌注温热的生理盐水20 ml至肝脏完全变白，组织称重后剪碎，加3 ml 0.1%PBST 洗涤组织3 次，3 000 r/min离心10 min，弃去上清。取1 ml大肠杆菌ER2738与组织静止感染30 min后，加入4 ml LB培养液室温孵育30 min，取100μl感染后的菌液测滴度，并计算总产出量。将剩余肿瘤组织感染后的菌液3 000 r/min离心10 min，沉淀全部扩增到10 ml LB，220 r/min，37℃振摇4.5 h，扩增与胃癌组织相结合的噬菌体，4℃下离心纯化，用于下一轮筛选，共4轮。

1.3 酶联免疫吸附法测定噬菌体单克隆对SGC7901的亲和力

按照酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒说明测定噬菌体单克隆对SGC7901的亲和力。

1.4 DNA序列的测定

将ELISA鉴定的噬菌体阳性克隆扩增，试剂盒提取阳性克隆的单链DNA，测序，并根据所测得的碱基序列比对出氨基酸序列。……