幸世涛　吴燕霞

[摘要] 目的 分析桥本氏甲状腺炎（HT）中Galectin-3及CK19的表达情况，探讨Galectin-3、CK19在HT合并甲状腺乳头状癌（PTC）及HT伴不典型细胞群中的表达意义。 方法 复习我院存档的HT病例切片，选取18例伴不典型细胞群的HT、18例伴PTC的HT，以20例单纯桥本氏甲状腺炎的病变组织做对照。行免疫组化单克隆抗体染色，一抗为Galectin-3和CK19，统计并分析。 结果 Galectin-3在HT伴PTC、HT伴不典型细胞群及对照组的表达率分别为83%、11%、5%，第一组与后两组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05），后两组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。CK19在HT伴PTC、HT伴不典型细胞群及对照组的表达率分别为89%、78%、10%，前两组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05），前两组与对照组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论 HT增生淋巴组织周围常可见不典型细胞群，这些不典型细胞群有时与PTC难以区分，通过Galectin-3、CK19联合免疫组化染色有助于判断不典型细胞群的性质。

[关键词] Galectin-3；CK19；桥本氏甲状腺炎；不典型细胞群；乳头状癌

[中图分类号] R736.1[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）29-0086-02

桥本氏甲状腺炎（Hashimoto thyroiditis，HT）又称慢性淋巴细胞性甲状腺炎（chronic lymphocyticthyroiditis，CLT），由日本学者Hashimoto（桥本）于1912年首先报道并描述[1]，是以甲状腺组织中淋巴细胞弥漫浸润、淋巴滤泡形成及滤泡上皮嗜酸性变为主要特征的甲状腺炎症性病变。目前认为HT与自身免疫有关，以30～50岁女性多见，起病隐匿，发展缓慢，病程较长。不少学者观察发现，HT病变中增生淋巴组织周围常见PTC核样改变的不典型细胞群，并可检测到具有PTC特征的基因重排，并认为该基因重排是HT癌变的分子学基础[2]，但是否可以就此判断为HT伴PTC仍有较大分岐。Galectin-3和CK19在甲状腺乳头状癌中的表达意义已较明确，Galectin-3、CK19联合应用可提高甲状腺乳头状癌诊断的敏感性[3]，但这两种抗体在桥本甲状腺炎中的研究较少。本文试图通过检测桥本氏甲状腺炎合并乳头状癌（PTC）和HT病变中具有PTC核样改变的不典型细胞群中Galectin-3、CK19的表达，初步探讨Galectin-3、CK19在桥本氏甲状腺炎合并乳头状癌及桥本氏甲状腺炎不典型细胞群中的表达意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院2006年8月～2011年8月存档的桥本氏甲状腺炎及桥本氏甲状腺炎合并乳头状癌病例，复习并选取其中临床资料完整的56例，其中桥本氏甲状腺炎伴PTC核样不典型细胞群18例、桥本氏甲状腺炎合并乳头状癌18例，单纯性桥本氏甲状腺炎20例。患者均为女性，中位年龄43岁。

1.2 方法

对上述56例患者病案蜡块切片行HE染色及免疫组化染色，一抗即用型抗体为Galectin-3和CK19，染色方法为即用型（非生物素）Envison二步法，所有抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中杉生物技术开发公司。染色步骤按试剂盒说明书操作：切片常规脱蜡至水，PBS冲冼；高温高压抗原修复2 min，滴加一抗4℃过夜，PBS冲洗后滴加非生物素二抗，25℃孵育15 min，PBS冲洗后滴加新鲜配制的DAB显色液，苏木素复染，盐酸酒精分化，脱水透明后中性树胶封片。

1.3 结果判断

结果以细胞质内出现棕褐色颗粒为阳性细胞，随机选择10个高倍视野，计算1000个细胞中阳性细胞的比例，无阳性细胞或阳性细胞数＜10%为阴性（-），阳性细胞数10%~25%为轻度阳性（+），26%~50%为中度阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。

1.4 统计学处理

采用SPSS 15.0统计软件进行分析，阳性率用相对数表示，组间资料采用χ2检验，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理检查

桥本氏甲状腺炎诊断标准：①甲状腺实质弥漫性淋巴细胞、浆细胞浸润，伴或不伴淋巴滤泡形成。②淋巴细胞浸润甲状腺滤泡，滤泡上皮变性、坏死或崩溃。③甲状腺滤泡萎缩。④滤泡上皮嗜酸性变及间质纤维化。PTC核样不典型细胞群的诊断标准[4]：一般位于增生的淋巴滤泡周围或陷于淋巴滤泡内，细胞立方或柱状，排列不规则、较拥挤，胞质淡染或嗜酸，核增大，圆形或椭圆形，呈毛玻璃样改变，部分细胞核内可见核沟或核内包涵体样结构，核/质比增大，但不足于诊断乳头状癌（封三图1、2）。桥本氏甲状腺炎合并乳头状癌的诊断标准：同时具有桥本氏甲状腺炎和典型甲状腺乳头状癌的形态特征，且以桥本甲状腺炎病变为主，乳头状癌往往为微小癌。

2.2 免疫组化染色结果

表1显示，Galectin-3在HT合并PTC中的阳性表达显著高于单纯HT及HT伴PTC核样不典型细胞群，且多数为较强的阳性表达（++～+++），具有统计学意义（P ＜ 0.05），而单纯HT与HT伴PTC样不典型细胞群Galectin-3的表达率没有统计学意义（P ＞ 0.05）。

表2显示，CK19在HT合并PTC及HT伴PTC核样不典型细胞群中的表达（封三图3）显著强于单纯HT，具有统计学意义（P ＜ 0.05）。

Galectin-3、CK19在HT合并PTC中均有强阳性表达，而表3显示在HT伴PTC核样不典型细胞群的病变组织中，Galectin-3和CK19的表达有显著差异（P ＜ 0.05），Galectin-3在HT伴不典型细胞群中的表达显著低于CK19在HT伴不典型细胞群中的表达，即便阳性，也大都为弱阳性（封三图4）。

表1～3显示，Galectin-3和CK19在HT合并PTC中均有强阳性表达，在单纯HT中的表达率较低，而在HT伴不典型细胞群中Galectin-3的表达显著低于CK19（P ＜ 0.05）。因此，在HT中若发现不典型细胞群，难于判断是否为HT合并PTC时，可联合检测Galectin-3和CK19，若两者均有强阳性表达，则应考虑HT合并PTC；若仅CK19强阳性而Galectin-3阴性或弱阳性，则应考虑为HT伴不典型细胞群，建议复查随访。

3讨论

恶性肿瘤的治愈关键在于早发现、早治疗。甲状腺癌早期病变常无特殊症状和体征，临床诊断常较困难，病理科报告的甲状腺癌大多数是在临床诊断桥本病或结节性甲状腺肿而手术切除的标本中发现的。近年来，桥本甲状腺炎伴乳头状癌的高比例已引起很多学者的重视，多数学者认为HT与PTC间有密切关系[5]，其发生是包括癌基因突变、重排、内分泌以及免疫等机体自身稳定系统调控失常等多种因素综合作用的结果。摆在病理学者面前的问题是如何在HT病变中发现早期PTC病灶，以不至于漏诊。

Galectin-3是一种具有氨基末端和羧基末端糖类识别区的糖类结合蛋白，存在于多种组织细胞的胞核、胞浆、胞膜及细胞间。许多研究显示，Galectin-3可以通过刺激细胞生长增殖，阻止肿瘤细胞凋亡以及促进血管生成、肿瘤细胞与细胞外基质相互作用等，在肿瘤的发生发展、转移中起重要作用[6，7]。

细胞角蛋白主要存在于正常上皮和各种上皮来源的肿瘤中，是哺乳动物细胞5种支架成份之一，CK19分子量为40 kD，是一种低分子量角蛋白，由KRT19基因编码，正常组织中含量极少，当细胞癌变时CK19含量升高并被释放出来。

本组试验表明，Galectin-3、CK19在HT合并PTC病变中均有较强阳性表达，两组间无显著差异，但在单纯HT中的表达较弱，即便阳性也是散在弱阳性表达，与HT合并PTC中的表达有显著差异。因此，Galectin-3、CK19联合检测的强阳性表达可作为诊断HT合并PTC的辅助指标，甚至有学者指出，HT中Galectin-3的强阳性表达应视为癌变[8]。而对于HT病变中的不典型细胞群，CK19和Galectin-3的表达则有显著差异，CK19的表达较强，其强度与HT伴PTC相当，与Prasad等[9]、张宝燕、李向红等[4]的研究非常接近，提示某些HT中的PTC核样不典型细胞群在细胞骨架水平上发生了改变，而获得了PTC的某些免疫表型特征，可能是HT合并PTC的前驱病变。但Galectin-3的表达率显著偏低，且阳性较弱、散，这也提示不典型细胞群还并非真正意义上的PTC，应引起足够的重视。因此，我们在临床病理工作中遇到的HT不典型细胞群，若诊断上难于把握，联合检测Galectin-3和CK19将有助于做出正确判断。

综上所述，Galectin-3、CK19联合检测可作为早期判断HT合并PTC的灵敏标记，还可用于判断HT病变中具PTC核样不典型细胞群是否为微小PTC病变的有用标记。对于针吸细胞学标本，随着细胞蜡块技术及快速免疫组化技术的兴起，相信Galectin-3、CK19在早期发现HT合并PTC的应用价值会凸显出来。

[参考文献]

[1]Hashimoto H. Zur kenntiss der lymphomatosen veranderung der Schilddrusse strumalymphoma. Arch klein Cgur，1912，97：218-222.

[2]陈佳瑞，王家东. 桥本甲状腺炎与甲状腺乳头状癌相关性的研究进展[J].现代肿瘤医学，2009，17（12）：2449-2451.

[3]潘丹玲，林洁. 500例甲状腺乳头状癌临床病理与Galectin-3、CK19和MC的表达分析[J]. 中外医学研究，2011，9（36）：1-2.

[4]张宝燕，李向红，王金泉，等. 桥本氏甲状腺炎不典型细胞群Galectin-3、CK19、CK7的表达及意义[J]. 临床与实验病理学杂志，2009，25（5）：519-522.

[5]Stella C L，Obruen JM，Forrester K L，et al. The Coexistence of Gestational on Pregnancy Outcome[J]. Am J perin atol，2005，25（6）：325-329.

[6]Perillo NL，Marcus ME，Baum LG. galectins：versatile modulators of cell adhesion，cell proliferation，and cell death[J]. J Mo1 med，1998，76（6）：402-412.

[7]Raz A，Zhu D，hogun V，et al. Evidence for the role of 34 kDa galactoside binding lectin in transformation and metastasis[J]. Int j cancer，1990，46（5）：871-877.

[8]张晓，邱新光. 桥本病伴结节样变中Galectin-3，CK19的表达及其临床意义[J]. 中国实用医刊，2008，35（1）：9-11.

[9]Prasad ML，Huang Y，Pellegata NS，et al. Hashimotos Thyroiditis with papillary thyroid carcinoma（PTC）-like nuclear alterations express molecular markers of PTC[J]. histopathology，2004，45：39-46.

（收稿日期：2012-05-23）