葛 雷，曲晓伟，胡建庭，单中杰，韩前河，杨庆祥，翟晓磊，赵 阳

(郑州人民医院，郑州450003)

膀胱癌是泌尿系统最为常见的恶性肿瘤，尤以移行细胞癌为多见，其发病机制仍不十分明确［1］。有研究表明细胞周期分布的改变与细胞癌变密切相关，许多癌基因、抑癌基因参与了细胞周期的调控。p57kip2作为候选抑癌基因，其表达与大肠癌、上皮性卵巢癌、肝癌、甲状腺癌、肝外胆管癌及肝内胆管癌等发病机制关系密切［2］，而与膀胱癌的关系报道仍较少。2011年8月～2012年4月，我们检测并比较了26例膀胱移行细胞癌组织和19例癌旁正常组织中的p57kip2mRNA。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集郑州人民医院26例原发性膀胱移行细胞癌患者手术切除的新鲜组织标本，为观察组。26例患者中男18例，女8例;年龄28～78岁，平均62.6岁。在遴选病例时将有酗酒和过量吸烟(＞20支/d)等不良嗜好者及化工制造从事业者等膀胱癌高危人群剔除。另取19例癌旁正常组织标本为对照组。

1.2 p57kip2mRNA检测方法 将组织研碎，按50～100 mg/mL标准加入Trizol，冰上放置5 min;然后加入200 μL氯仿，快速震荡15 s，冰上放置10 min后，4℃、15 000 r/min离心15 min;仔细吸取上层水相，移至另一支EP管中;加入等体积(约500 μL)异丙醇，冰上放置10 min;4℃、15 000 r/min离心15 min，弃上清，加入75%乙醇(焦碳酸二乙酯处理灭菌水配制)500 μL，充分洗涤沉淀物;4℃、10 000 r/min离心5 min后弃上清，室温干燥3 min，DEPC处理灭菌纯水20 mL溶解RNA沉淀;分光光度计测定总RNA产物量及纯度，提取的RNA置于－80℃冰箱冻存。参照文献设计引物［1，2］。PCR反应条件: 95℃变性5 min，然后按95℃ 30 s，58℃ 45 s，72℃60 s，进行35个循环，最后72℃延伸10 min。

制备2%的琼脂糖凝胶，含溴化乙锭0.5 μg/ mL。取PCR扩增产物5 μL与上样缓冲液1 μL混匀，加入加样孔。……