李曹龙，秦 艳，欧秀玲，崔郑龙，王爱英 *，祝建波

（新疆石河子大学 生命科学学院，新疆 石河子 832000）

蛋白酶是一种重要的工业用酶，其生产几乎占酶制剂市场的65%以上[1]，广泛运用于食品、药物、皮革制备、蛋白水解和纺织工业等[2-3]。常温蛋白酶作为生物大分子的活性物质，因其在保存和应用的过程中常常出现不稳定的现象，特别是在高温、强酸、强碱和高渗等极端的条件下易失活，在工业应用上受到了较大的限制[4]。耐热蛋白酶由于具有显著的热稳定性及其对有机溶剂、去垢剂和变性剂有较强的抗性而在蛋白酶应用的各个领域显示出极大的潜力[5]。

有“火洲”之称的新疆吐鲁番，有其独特的气候特征，干燥炎热，强辐射。在夏季，其地表温度可达75℃～80℃[6]。生活在这种极端环境下的微生物类群，有其独特的特征。因此，采集新疆吐鲁番地区土壤，从中分离筛选高产蛋白酶菌株，通过对其产酶条件的研究，为其在生产实践中的应用奠定一定的理论基础。

1 材料和方法

1.1 材料

于2012年8月采集新疆吐鲁番地区0～15cm的表层土样。

1.2 仪器与试剂

乌鲁木齐祥生仪器有限公司HANNApH211型PH计，上海凌光Spectrumlab 752S紫外可见分光光度计，恒温水浴锅，Eppendorf冷冻离心机，BIOMETRAT personalPCR仪。

100μg/L标准酪氨酸溶液，0.02mol/L pH值为7.5磷酸缓冲液，10g/L酪素溶液，0.4mol/L三氯乙酸溶液。试验所需药品均购自上海生工。

1.3 培养基

①LB平板培养基。

②生长培养基（g/L）：蛋白胨10g，葡萄10g，酵母粉3g，NaCl 0.5g，琼脂20g，pH值为7.0，121℃灭菌20min。

③筛选培养基（g/L）：K2HPO41g，KCl 5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.1g，琼脂20g，pH值为7.2，121℃灭菌20min。脱脂乳10g，115℃灭菌15min。

④液体发酵基础培养基（g/L）：蛋白胨5g，葡萄糖5g，Na2HPO40.1g，CaCl20.1g，吐温-80 1mL，pH值为7.0，121℃灭菌20min。……