惠 明，尚小利，田 青，张开平

（河南工业大学 生物工程学院，河南 郑州 450001）

黄曲霉（Aspergillus flavus）在自然界分布十分广泛，用其制曲来酿造黄酒、豆酱等在中国、日本具有悠久的历史[1]。黄曲霉群微生物包括黄曲霉、米曲霉及寄生曲霉等，部分株系在一定条件下产生黄曲霉毒素，对人和动物具有很强的致癌作用，但有些株系不产毒素（如苏-16、AS 3.800、A.flavusYA4.9等），并且能产生丰富的液化型淀粉酶和蛋白酶，用于麦曲、米曲制作中起糖化、蛋白分解等作用[2-3]。“以麦制曲，用曲酿酒”是中国黄酒的特色，制曲质量的好坏在黄酒酿造中具有极其重要的地位[4]。黄酒界有以黄曲霉制曲，因其曲种苦涩味较轻，酿酒品质好、风味独特，但糖化酶活力低，因此分离和筛选高糖化酶活力的黄曲霉菌株已成为黄酒业当务之急。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 材料

样品：镇平五朵山大曲、香花镇散曲、安徽双轮白酒曲、镇平大曲、米曲、丹溪红曲米、苏州甜酒药等；原料：马铃薯、麸皮、玉米粉，市售。

1.1.2 试剂

蛋白胨、葡萄糖、牛肉膏、琼脂粉、可溶性淀粉生化试剂：由北京奥博星生物技术责任有限公司提供；氯化钠、脱氧胆酸钠盐、酒石酸钾钠、硫酸亚铁、3，5-二硝基水杨酸等（分析纯试剂）：由天津科密欧化学试剂开发中心提供。

1.1.3 培养基

（1）PDA培养基[5]：取新鲜马铃薯，去皮后称取200g，加入1000mL水，煮沸20min后，用4层纱布过滤，清液中加入20g葡萄糖和20g琼脂，煮沸，补足失水。121℃灭菌20min；（2）透明圈培养基[6-7]：可溶性淀粉4g，蛋白胨10g，氯化钠5g，牛肉膏3g，脱氧胆酸钠lg，琼脂20g，水1000mL，pH7.2，121℃灭菌15min；（3）孟加拉红培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钠1g，硫酸镁0.5g，1:3000孟加拉红100mL，氯霉素0.1g，脱氧胆酸钠1g，琼脂粉20g，pH6.5，水1000mL，121℃灭菌15min；……