于丽娟，丁 斐，叶 辉*

（南通大学 生命科学学院，江苏 南通 226019）

麦曲作为黄酒发酵的糖化剂，含有大量能分泌淀粉糖化酶的微生物[1]，糖化酶能将淀粉水解为葡萄糖，进而被微生物发酵，生产酒精。糖化酶活力高，原料利用率就高，因此筛选高产糖化酶菌株对酿酒工业具有重要意义。本研究从不同麦曲中分离筛选高产淀粉糖化酶菌株，依据形态特征和ITS序列分析对筛选菌株进行鉴定，并研究了粗酶的酶学特性。

1 材料与方法

1.1 培养基

斜面培养基：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，水1000mL，琼脂20g，自然pH值，121℃湿热灭菌20min。

选择性平板培养基（产透明圈）：可溶性淀粉2g，蛋白胨0.5g，琼脂20g，氯化钙0.4g，磷酸氢二钠0.8g，自然pH值；水1000mL，121℃高压蒸汽灭菌20min。

固体发酵基础培养基[2]：麸皮8g，玉米粉1g，大豆粉1g，盐溶液10mL，121℃高压蒸汽灭菌20min（盐溶液：K2HPO42%，（NH4）2SO44%）。

1.2 菌株筛选

初筛：取粉碎好的麦曲10g，装入带玻璃珠的90mL无菌水的三角瓶中，摇晃打散，使麦曲中的微生物形成悬浮液，用无菌移液管对悬浮液进行稀释，稀释至10-1～10-6。吸取各种稀释度溶液0.1mL涂布于选择性培养基平板上，置于30℃恒温培养箱中培养3d，取出培养皿，滴加卢戈氏碘液，测量透明圈直径D和菌株直径d。挑取D/d较大的菌株接种斜面保藏。

复筛：无菌水洗出孢子，用血球计数板调整孢子浓度，接种于固体培养基中。混匀后，30℃培养72h，培养期间每隔一段时间摇动一次。培养结束后，加入50mL蒸馏水并将固体培养基捣碎，40℃水浴1h，取出粗酶液8000r/min离心5min，弃沉淀得粗酶液，测定淀粉糖化酶活力。

淀粉糖化酶活力测定采用碘量法[3]。酶活力单位定义为1mL酶液，于40℃、pH 4.6的条件下，1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为1个酶活力单位，以U/g（U/mL）表示。……