张卫兵，张 炎，文鹏程，刘芳宁，巨 蕾，梁 琪*

（甘肃农业大学 食品科学与工程学院，甘肃 兰州 730070）

乳糖酶（Lactase）学名为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶（β-D-galactoside galactohydrolase，E.C.3.2.1.23），又名β-半乳糖苷酶（β-galactosidase），是一类催化β-D-半乳糖苷键发生水解的酶，能将乳糖水解成半乳糖和葡萄糖[1]。乳糖酶来源丰富，可以从很多微生物、植物和动物体中获得。利用用微生物发酵法获取乳糖酶的方法具有操作方便、生产效率高、适用于工业化生产等优点[2]。

目前为止，文献报道的产乳糖酶微生物很多，其中包括黑曲霉（Aspergillusniger）、米曲霉（Aspergillus oryzae）、脆壁克鲁维酵母（Kluyveromycesfragilis）、乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）、成团肠杆菌（Enterobacter agglomerans）、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、环状芽孢杆菌（Bacillus Circulans）、嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）、保加利亚乳杆菌（Lactobacillusbulgaricus）、双歧杆菌（Bifidobacterium）等[3-8]。不同微生物来源的乳糖酶性质及用途不同：霉菌作用最适pH值偏酸性（pH2.5～5.0），主要用于酸性乳清和干酪的水解；酵母所产乳糖酶最适pH值近中性（pH6.0～7.0），适合于牛乳和甜乳清的加工处理；细菌所产的酶与酵母最适pH值接近且具有较高的耐热性[9]。细菌具有体积小、繁殖快、发酵过程易控制等特点，应用于工业化生产有很大的潜力[10]。

本试验以实验室前期从甘肃省天祝牧区牦牛乳酸奶中分离的产乳糖酶菌株Enterobactersp.SYA2[11]为研究对象，对Enterobactersp.SYA2乳糖酶的酶学性质进行了研究，以期为其进一步应用和研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

ONP（分析纯）：南京化学试剂有限公司；X-gal（色谱纯）：西安舟鼎国生物技术公司；ONPG（色谱纯）：科宏达生物技术有限公司。

1.1.2 培养基

种子培养基：乳糖10g/L、蛋白陈10g/L、酵母膏3g/L、NaCl 3g/L，pH7.0；……