张宇浩 马昱 郭曦 王勤 曹志娟

（1.复旦大学附属中山医院神经内科，上海 200032；2.复旦大学附属中山医院分部内科，上海 200052；3.空军94789部队机关医院口腔科，江苏南京 210018；4.复旦大学药学院，上海 200032）

存在于脑组织和脑脊液中的多种氨基酸类神经递质，对于调节机体生理活动具有重要作用，其含量及比例的变化伴随着多种中枢神经系统疾病的发生及发展［1］。其中，谷氨酸（glutamate，Glu）和天门冬氨酸（aspartate，Asp）是脑部的兴奋性神经递质，牛磺酸（taurine，Tau）是脑部的抑制性神经递质，γ－氨基丁酸（γ－aminobutyric acid，γ－GABA）的作用较为复杂。测定神经递质含量的变化对于神经系统疾病的诊断、治疗和预后分析有重要的参考价值。常用的氨基酸类神经递质的测定方法为高效液相色谱法、微流控、电泳法分离与衍生化后荧光检测相结合［2－3］。通常采用丹酰氯衍生化、邻苯二甲醛（O－phthalaldehyde，OPA）、2，4－二硝基氟苯、2，6－二甲基－4－喹啉羧酸－N－羟基琥珀酰亚胺酯［4］等试剂进行柱前衍生荧光检测氨基酸的含量［4］。其中，OPA检测的灵敏度高，衍生化反应迅速安全。本研究对大鼠脑组织中的神经递质的测定，采用OPA作为柱前衍生化试剂，建立一种简单、快速、灵敏的高效液相色谱技术，以期为神经系统疾病发病机制的研究提供方法基础。

1 资料与方法

1.1 试剂和仪器 Asp、Glu、γ－GABA、Tau和OPA（纯度80%）购自于上海日初生化有限公司；高丝氨酸（homoserine，Hse）和β－巯基乙醇购自于Sigma公司。乙腈和甲醇购于汉邦试剂有限公司，均为一级色谱纯。高氯酸、磷酸二氢钾、碳酸钾等试剂均购自于国药试剂集团，分析纯。超纯水由Millipore公司生产的Milli－Q纯水仪制备。……