邹利光 张 松 戚跃勇 廖翠薇 梁开运

乳腺癌是威胁妇女健康最常见的恶性肿瘤，乳腺内淋巴管十分丰富，淋巴道转移是乳腺癌最常见的转移途径，是决定乳腺癌分期和治疗方案选择的关键因素之一[1]。随着淋巴管内皮细胞相关因子研究的进展，探讨淋巴管生成与乳腺癌转移扩散的关系成为乳腺癌研究新的热点[2，3]。本文采用二甲基苯蒽灌胃诱发大鼠乳腺肿瘤，动态观察乳腺癌发生过程中乳腺组织形态学改变和淋巴管密度(lymphatic vessel density，LVD)变化，分析乳腺癌病理分级与肿瘤LVD的相关性。

1 材料与方法

1.1 动物模型建立

38～50天龄SPF级Wistar雌性大鼠96只，体重105～142 g，由第三军医大学实验动物中心提供。7,12-二甲基苯蒽(7，12- demethylbenz[a] anthracene，DMBA)(美国Sigma公司)，兔抗鼠 podoplanin抗体(AngioBio公司)。配制浓度为10 mg/ml的DMBA麻油溶液，将96只大鼠分批进行灌胃，一次剂量为1 ml，1周后，应用同样的剂量进行第2次灌胃。

1.2 病理观察

造模后每日观察大鼠大体情况，手摸6对乳腺部位，记录有无特殊改变。从第1次灌胃日计时，排除9周前早期死亡的16只大鼠，存活≥10周大鼠80只。从第10周开始，每2周取10只大鼠活杀，至第24周处死所有大鼠。取乳腺肿瘤组织置于10%甲醛液中固定，石蜡包埋。HE染色，确定乳腺肿瘤病理类型及分化程度。乳腺肿瘤组织学分类参照WHO乳腺肿瘤组织学分类标准(2003)[4]，大鼠乳腺癌病理诊断参照Dunn等提出的实验性大鼠乳腺癌的诊断标准[5]。参照微血管密度计数法，采用“热点”法计数淋巴管密度，低倍视野(×100)下寻找热点，高倍视野(×200)下计数3个视野最高数目的微淋巴管，以其平均数表示。……