王晓燕，王世军，吴富东

(山东中医药大学，山东 济南250355)

针灸要推广至全世界，针灸学理论研究及其科学内涵研究显得尤为重要。经穴-脏腑相关理论是针灸学的重要内容，是整体观念体现之一，人体表各穴位与内脏器官之间相互联系、相互影响。本实验通过观察电针足三里穴调节胃肠功能紊乱大鼠5-HT含量及表达，揭示足三里穴与胃之间存在特殊的经穴-脏腑相关性。

1 实验材料

1.1 动物

雄性SD大鼠，SPF级，体重(230±20)g，48只。由山东中医药大学实验动物中心提供。

1.2 主要仪器

WT11001R型电子天平;HANS 100疼痛治疗仪;LD4-2A型低速离心机;海尔超低温冷冻冰箱;Leica手动轮转式切片机;R-35刀片;101-3型号电热鼓风干燥箱;Image-Pro Plus 5.1专业图像分析软件处理系统;Nikon照相机;Nikon YS2(三目)显微镜。

2 实验方法

2.1 动物造模方法

采用腹腔注射利血平注射液制作FGID大鼠模型［1］，0.5 mg/(kg·d)，连续 14 天。

2.2 动物分组及针刺方法

48只大鼠随机分为正常组、模型组、足三里1组、足三里2组、三阴交1组、三阴交2组。每组8只。

正常组:只束缚不针刺7天;三阴交1组和足三里1组:只束缚不针刺7天，第8天针刺30 min;三阴交2组和足三里2组:电针7天。大鼠的足三里穴及三阴交穴定位及针法参考《实验针灸学》［2］。针下得气后，连接HANS 100疼痛治疗仪，输出电流为1 mA，电针无关电极选取位置为足三里穴向外侧旁开10 mm。每次30 min，日1次。

2.3 实验检测方法

高效液相色谱仪测定5-HT的含量:颈动脉取血，离心，取上清，检测含量;处死大鼠后取脑，置于0.9%盐水冰面上取下丘脑，称重后冰面上匀浆，离心，取上清，检测含量。

免疫组化法检测组织中5-HT的表达:处死大鼠后取大鼠胃窦组织一块，结肠始段约1.5 cm长一块，取大脑。4%多聚甲醛固定，乙醇逐级脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋，蜡块切片厚度为6μm，连切3张。切片灭活内源性酶后热修复抗原，滴加一抗(小鼠IgG)，DAB显色。镜下观察并拍照，图像选用IPP 5.1专业图像分析软件处理，计算切片的累积光密度(IOD)值:3张图片的IOD值的均值;最后得出样本阳性细胞表达的IOD值:2张切片的IOD值均值［3］。

2.4 统计方法

统计方法采用软件统计SPSS10.0 for Windows进行分析数据资料，以±s表示，P＞0.05为无显著性差异，P＜0.05为有显著性差异。

3 结果

3.1 电针对FGID大鼠血清、下丘脑5-HT的影响

表1 电针对FGID大鼠血清、下丘脑5-HT的影响(±s)

表1 电针对FGID大鼠血清、下丘脑5-HT的影响(±s)

注:与正常组比较，1)P＜0.05;与模型组比较，2)P＜0.05;与三阴交1组比较，3)P＜0.05;与三阴交2组比较，4)P＜0.05。

组别 n 血清(ng/ml) 下丘脑(ng/g组织湿重)8 542.99±40.10 117.80±32.00模型组 8 704.97±170.731) 225.39±19.481)三阴交1组 8 620.56±187.31 129.86±16.952)三阴交2组 8 634.18±154.26 116.48±14.342)足三里1组 8 553.58±126.822)3) 91.59±9.982)足三里2组 8 541.56±119.692)4) 96.21±20.242)正常组

表1结果显示，造模后5-HT含量明显高于正常组(P＜0.05);电针后，足三里1、2组和三阴交1、2组血清、下丘脑5-HT含量较模型组降低(P＜0.05)，降低血清5-HT方面，足三里2组低于三阴交2组(P＜0.05)。

3.2 免疫组化检测5-HT阳性表达的实验结果

胃、肠、脑组织经免疫组化染色后显示，5-HT阳性细胞在胃粘膜的主要分布，见封三彩图1;在肠粘膜的主要分布，见封三彩图2;在大脑皮层的分布，见封三彩图3。阳性细胞多呈椭圆形、梭形、锥体形，胞质内显示棕色颗粒为阳性。在胃、肠平滑肌层有丰富的5-HT能免疫阳性神经纤维，见封三彩图1、2。

图1 5-HT阳性细胞在胃粘膜分布

图2 5-HT阳性细胞在肠粘膜分布

图3 5-HT阳性细胞在大脑皮层分布

表2 电针对FGID大鼠组织中5-HT表达的影响(±s，n=8)

表2 电针对FGID大鼠组织中5-HT表达的影响(±s，n=8)

注:与正常组比较，1)P＜0.05;与模型组比较，2)P＜0.05;与三阴交1组比较，3)P＜0.05;与三阴交2组比较，4)P＜0.05。

组别n IOD胃肠脑59.99模型组 8 12815.49±1099.111) 4562.31±969.081) 8067.48±1517.951)三阴交1组 8 8160.12±1185.322) 4492.43±1360.55 7894.66±1813.63三阴交2组 8 9355.67±906.112) 4229.84±750.48 6162.09±1153.582)足三里1组 8 8529.49±1082.692) 3428.26±759.082)3) 6089.50±868.922)3)足三里2组 8 7832.55±962.422)4) 3486.25±916.302)4) 5468.35±1018.952)正常组 8 6645.94±787.95 3084.42±823.14 5368.81±17

由表2可见，模型组胃、肠、脑组织中5-HT的阳性表达皆高于正常组(P＜0.05)，各针刺组中，胃组织中5-HT的阳性表达降低，较模型组有显著性差异(P＜0.05)，足三里2组低于三阴交2组(P＜0.05);足三里1、2组肠组织中5-HT阳性表达低于模型组(P＜0.05)，足三里1组低于三阴交1组(P＜0.05)，足三里2组低于三阴交2组(P＜0.05);足三里1、2组和三阴交2组脑组织中5-HT阳性表达低于模型组(P＜0.05)，足三里1组低于三阴交1组(P＜0.05)。

4 讨论

5-HT是重要的神经递质，是在“脑-肠轴”中起重要作用的神经递质［3］。大量的5-HT过度刺激分泌神经元，会出现胃肠道分泌功能异常而引起FGID，出现腹胀、腹泻等相关症状。本实验研究结果表明，FGID模型大鼠血清、下丘脑5-HT含量及在胃、肠、脑等组织中的表达明显高于正常对照组，这跟以往的研究一致［4～5］，可能是过量5-HT会与靶细胞结合，加强胃肠平滑肌收缩，胃肠动力异常，从而形成胃肠功能紊乱。实验研究数据表明，电针足三里、三阴交对FGID大鼠模型组血清及组织中5-HT的高含量及表达有明显抑制作用。通过实验思考，5-HT参与机体多种生理功能活动，造模后胃、肠、脑等相关组织的5-HT分泌增强，电针后抑制5-HT的分泌，整个调节过程可能会引起整个5-HT受体细胞系统的生理活动随之进行调整改变，电针的作用是如何使相关组织器官的5-HT阳性细胞的表达发生变化，通过何种途径来调节，对此进行下一步的研究，也将为临床治疗胃肠功能紊乱综合征提供新思路和科学基础。

在针刺调整效应方面，足三里与三阴交之间又存在着差异性，电针足三里效果明显优于三阴交，通过实验数据来看，电针足三里穴更能加速异常过量的5-HT代谢，诱导分泌细胞加速凋亡或抑制增殖，进而抑制其分泌5-HT的含量及表达，电针足三里的作用较三阴交更明显。提示足三里作为胃经合穴、胃的下合穴，对胃肠的调节作用优于其他穴位，说明足三里与胃之间存在穴位脏腑相关特异性。

［1］ 姚永莉，宋于刚，张万岱.实验性大鼠胃肠道功能紊乱模型的建立［J］.第一军医大学学报，2001，21(5):338-340

［2］ 郭义.实验针灸学［M］.北京:中国中医药出版社，2008:415

［3］ 姜敏，凌立平，傅宝玉.肠易激综合征患者结肠5-HT的分布特点［J］.世界华人消化杂志，2005(13):541-543

［4］ 李兆申，詹丽杏，邹多武，等.肠易激综合征患者分泌5-羟色胺的肠嗜铬细胞形态及功能的改变［J］.中华消化杂志，2004(2):94-97

［5］ Spiller RC，Jenkins D，Thomley JP，et al.Increased rectal mucosal entereendoefine cells T lymphoeytes and increased gut permeability following acute camplobacter enteritis and in post-dysenteric irritable bowel syndrome［J］.Gut，2000，47(6):804