曹新梅，张岱权，王 栩，任德莲，刘代玉

(1泸州医学院，四川泸州646000;2泸州医学院附属医院)

HER2基因是一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面受体。该受体数量、结构的异常变化常可导致细胞生长异常及癌肿的形成。有文献报道［1］，1/3以上的非小细胞肺癌存在HER2蛋白过度表达。2010年7月～2011年12月，我们观察了靶向HER2基因的siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 人肺腺癌A549细胞株(由泸州医学院免疫学实验室提供)。RPMI 1640(美国Invitrogen公司)、小牛血清(天津海洋生物)。焦碳酸二乙酯(DEPC)(美国Sigma公司)，LIPOFECTAMINE 2000 Reagent、Trizol(美国Invitrogen公司)，实时荧光定量PCR试剂盒(日本TOYOBO公司)，卡铂(齐鲁制药有限公司)，SABC免疫组化试剂盒(丹麦DAKO公司)，AnnexinⅤ-FITC Kit凋亡试剂盒(凯基公司)。

1.2 方法

1.2.1 肺腺癌A549细胞培养及分组 肺腺癌A549细胞株常规培养于含10%小牛血清的RPMI 1640培养基。取对数生长期肺腺癌A549细胞制备成细胞悬液，接种于6孔板。当细胞融合40% ～60%时，分为6组进行转染:2621组、1724组、1491组(数字为合成3对HER2 siRNA的代码)、阴性对照组、GAPDH阳性对照组和空白组，每组3个复孔。以LIPOFECTAMINE 2000 Reagent为转染试剂，按照说明书进行siRNA转染。

1.2.2 实时荧光定量RT-PCR检测HER2 mRNA水平 转染24 h后，用Trizol试剂抽提每组细胞的总RNA，逆转录，按照试剂盒说明行实时荧光定量PCR。反应条件:95℃预变性10 s，95℃变性10 s，60℃退火15 s，40个循环。运用 MyiQTMOptical Module的电脑软件分析系统对实时荧光定量PCR反应结果进行分析。

1.2.3 免疫组化检测肺腺癌A549细胞HER2蛋白表达水平 将经多聚赖氨酸包被处理过的玻片放入6孔板中，接种肺腺癌A549细胞，进行转染。转染48 h后，取出玻片，用PBS冲洗2次，在中性甲醛中固定，SABC常规免疫组化方法检测HER2蛋白的表达水平。……