邢晓静,郑洪新,宋 纯

(1.辽宁省肿瘤医院消化肿瘤科辽宁中医药大学博士后在站,辽宁沈阳,110042 2.辽宁中医药大学,辽宁沈阳,110032;3.辽宁省肿瘤医院,辽宁沈阳,110042)

大肠癌是全球常见的恶性肿瘤,在欧美国家位居致死恶性肿瘤第二位[1],在我国也呈现发病率逐渐上升的趋势。和大多数恶性肿瘤一样,大肠癌的发病机制尚未明确,尽管近年来外科手术技术和化疗手段在不断提高,但大肠癌患者的5年生存率仅为40%,而术后的复发和肿瘤转移成为大肠癌致死的主要原因之一[2],所以,对大肠癌的有效治疗及作用机制研究尤为重要。本课题通过外源添加双糖链蛋白聚糖Biglycan处理大肠癌细胞系HT229和SW480,检测大肠癌细胞凋亡情况和侵袭能力等生物学特征变化,为寻找治疗大肠癌的新靶点提供重要的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

DMEM培养基、胎牛血清购自 Hyclone公司;大肠癌细胞HT229和SW480购自中科院上海细胞库;Biglycan购自Sigma公司;Matrigel购自BD公司;AV/PI细胞凋亡检测试剂盒、细胞周期检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所; Rb、pRb、Ras和 GAPDH抗体购自Santa cruz公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养:大肠癌细胞 HT229和SW480培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养。

1.2.2 Transwell法检测Biglycan对大肠癌细胞侵袭能力的影响:按1:7体积比稀释过夜解冻的Matrigel,充分混匀后按每小室 100μL铺胶至Transwell上室内部的膜上,置37℃培育3 h。将Transwell小室放入24孔板中,下室加入含10%胎牛血清的DMEM培养液500μL;取HT229和SW480细胞悬液100μL分别加入上室,细胞数为1×105个/孔,在上室加入Biglycan至终浓度为0、50、100 nmol/L,每个样……