Tn5及其应用研究进展
2012-02-24徐广宇魏成国马金姝张晓天
徐广宇,魏成国,马金姝,张晓天,王 放*
(1.吉林大学白求恩医学院 病原生物学教研室,吉林 长春 130021;2.北华大学药学院,吉林 吉林 132013)
转座子是基因组中一段可移动的DNA序列,可以通过切割、重新整合等一系列过程从基因组的一个位置“跳跃”到另一个位置[1]。Barbara Mc-Clintock[2,3]根据大量遗传学和细胞学研究结果,于1951年提出了生物的基因组中存在转座子学说,这是遗传学发展史中划时代的重大发现,将基因概念向前推进了一大步。近年来,随着现代分子生物学技术的发展及基因功能研究的不断深入,转座子技术的应用越来越广泛。Transposon 5(Tn5)由于其转座的随机性好、稳定性高、插入位点容易测序等特点,得到越来越多的应用,已经成为分子遗传学及基因诊断学研究的热门工具[4,5]。本文主要对Tn5的基本结构、转座机制及其在必需基因、蛋白质结构功能、基因测序方面的应用研究进展作一综述。
1 Tn5简介
1.1 Tn5的基本结构
Tn5是复合转座子,由一个中心区域和二个侧翼序列组成。中心区域含有3个抗生素抗性基因,包括卡那霉素(kanamycin)、链霉素(streptomycin)和博莱霉素(bleomycin),中心区域的两侧的侧翼序列IS是一种自主性的转座因子。位于Tn5右侧的IS50R编码含有476个氨基酸的转座酶(transposase,tnp)和一个转座阻遏蛋白(inhibitor protein,Inh),这两种蛋白质都由同一段DNA序列编码;Tn5左侧的IS50L与右侧的IS50R只是一对碱基的差别,IS50L上存在一个突变序列,可以使翻译提前终止,不能产生有活性的转座酶和转座阻遏蛋白[6]。每个IS50转座元件的两端有长度19 bp的outside end(OE)和inside end(IE)末端序列,OE是转座酶的结合位点(图1)。……
