牟晓梅，蔡尚霞，马 靖

（1.北华大学附属医院 检验科，吉林 吉林 132011；2.吉化集团总医院）

急性白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，与其他实体瘤一样存在着显著的新生血管。血管内皮生长因子（VEGF）是促进血管生成的关键因子，也是白血病生长、转移和存活的重要因子。本课题应用酶联免疫检测方法，分别检测初诊未治组、复发组、完全缓解组和正常对照组VEGF的血清水平，探讨此类与肿瘤相关因子在不同阶段急性白血病患者体内的变化规律，以进一步阐明其与急性白血病发生、发展及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验组 病例选自2007年1月至2010年10月在北华大学附属医院血液科及血液内科住院的急性白血病患者30人，所有病例均由外周血象、骨髓象、细胞化学染色及流式细胞学检查确诊。（1）初诊未治组14例：包括急性淋巴细胞白血病（ALL）11例，急性髓系白血病（AML）3例；男8例，女6例，中位年龄20.5岁。（2）复发组5例：其中ALL 2例，AML 3例；男3例，女2例，中位年龄21.3岁。（3）完全缓解组11例：其中ALL 8例，AML3例：男5例，女6例，中位年龄18.9岁。各诊断标准参阅内科学第7版。

1.1.2 正常对照组 健康者12名，均为我院预防保健科经健康体检合格的儿童，男6名，女6名，中位年龄为22.6岁，其纳入均符合以下标准：（1）无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患，肝、肾功能试验正常。（2）无血液病史。（3）无活动性感染，采血前24小时内体温正常。（4）无免疫性疾病及其他肿瘤性伴发病史。

1.2 方法

采用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗夹心法，试剂盒选用上海信然生物技术有限公司进口自美国的VEGF定量ELISA试剂盒，具体试验步骤按说明书进行。

1.3 统计学方法

应用SPSS 11.5版软件包进行统计分析，计数资料以均数±标准差（±s±s）表示，两均数之间的差别用t检验，如果方差不齐用t′检验，P＜0.05认为有显著性差异，P＞0.05认为无显著性差异。

2 结果

初诊未治组和复发组的VEGF血清浓度明显高于正常对照组（P均＜0.05），完全缓解组的VEGF血清浓度与正常对照组无显著性差异（P＞0.05），但仍高于正常对照组（表1）。初诊未治组、复发组与完全缓解组之间有显著性差异（P＜0.05）（表2）。

表1 各组VEGF水平与对照组比较

表2 初诊未治组、复发组VEGF水平与完全缓解组比较

3 讨论

很多生理和病理过程中都存在血管的生成，而血管生成受众多刺激性和抑制性的血管生成因子调节联系，VEGF是最重要的促血管生成因子，且有促肿瘤转移、伤口修复等多种功能，在恶性肿瘤细胞的生长和增殖中扮演重要角色。急性白血病与其他实体瘤一样存在显著的血管生成，且大部分肿瘤细胞有 VEGF的高表达［1］。

本实验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗夹心法检测了30例急性白血病患者和12例健康体检者的血清VEGF水平。结果显示，初诊未治组和复发组患者的VEGF水平明显于正常对照组，说明了急性白血病患者血清中VEGF存在异常高表达，而VEGF对白血病发生、发展与转归过程起到重要的调节作用，与文献报道一致［2］。目前认为，这是由于肿瘤细胞的大量增殖、代谢，导致局部相对缺氧，诱导VEGF表达上调所致［3］，并通过抑制细胞凋亡和宿主抗肿瘤免疫，进而增加了白血病细胞的生存能力［4］，同时也与某些原癌基因的激活、抑癌基因的失活和某些细胞因子的改变有关［5］。大量增生的新生血管能够在化疗中存活下来，作为不同的细胞因子和生长因子的来源，通过自分泌和或旁分泌作用，支持残留白血病细胞的生长。

在本实验中，完全缓解组患者的血清VEGF水平与正常对照组无显著差异，但总体水平仍高于正常对照组，这可能是因为急性白血病患者虽然骨髓获得骨髓缓解，但体内仍存在微量残留白血病病灶。此外，化疗后患者持续的贫血状态导致的机体缺氧，诱导了机体组织细胞分泌VEGF，化疗损害或化疗后骨髓抑制期并发的感染性炎症刺激也可导致血清VEGF继发性升高，使患者存在骨髓微血管增生，这往往成为日后复发的根源，因而需要不断强化治疗。

通过对初诊未治组、复发组与完全缓解组的分别统计分析发现，两组均有显著性差异，提示目前采用的化疗药物有可能影响白血病细胞VEGF的分泌途径、阻断其信号传导，减轻骨髓中新生血管的形成。Beigore［6］通过对VEGF在恶性血液肿瘤、实体瘤和正常对照组中的表达发现，血液肿瘤的血清VEGF表达明显高于对照组，同时也高于实体瘤组。而在应用了抑制血管生成药物后，肿瘤细胞负荷明显降低。而Kiser等［7］将抗血管新生药物用于白血病的模型鼠，经过4周持续性药物治疗后，白血病细胞团减少90%。说明，VEGF能推进急性白血病病情发展，使用VEGF拮抗剂是一种十分有研究价值的急性白血病治疗方案。这些研究结果与本课题的初诊未治组和复发组的VEGF血清浓度明显高于完全缓解组和正常对照组。由此可推测血清VEGF水平是一个有独立意义的预后指标，可用来监测小儿急性白血病的发展，为急性白血病的治疗提供更有价值的依据。

［1］De bont Es，Bosafi S，Jacobs S，et al.Increased bone marrow vascularization in patients with acute myeloid leukemia；a possible role for vascular endothelial growth factor［J］.Br J l－laematol，2001，113（2）：296.

［2］Aguayo A，antarjian HM，Estey EH，et al.Plasma vascular endothelial growth factor levels have prognostic significance in patients with acute myeloid leukemia but not in patients with myelodys plastic syndromes［J］.Cancer，2002，95（9）：1923.

［3］Scott PA，Gleadle JM，Bicknell R，et al.Role of the hypoxia sensing system，acidity and reproductive hormones in the variability of vascular endothelial growth factor in duction in human breast carcinoma cell lines［J］.Int J Cancer，1998，75：706.

［4］Katoh O，Takahashi T，Oguri T，et al.Vascular endothelial growth inhibits apoptotic death in hematopoietic ce Hs after exposure tc chemotherapeutic drugs by inducing MCLI acting as all antiapoptotic factor［J］.Cancer Res，1998，58（23）：5565.

［5］Takahashi Y，Bucana CD，Cleary KR，et al.P53，vessel count，and vascular endothelial growth factor expression in human colon cancer［J］.Int J Cancer，1998，79：34.

［6］Beigore FM.I，LIP GY，Wadley M，el a1.Vascular endouthelial growth factor（VEGF）and soluble VEGF receptor（sFLT－1）in haematolosicalcancer［J］.Br Haematol，2003，108（1）：30.

［7］Kiser M，MeCubrey JA.1nhibitors of angiogenesis selectively reduce the malignan cell load in nxlentmodels of human myeloid leukemias［J］.Leukem／a，2002，16（3）：376.