冯娜娜，陶 婷

（上海交通大学医学院附属瑞金医院 老年病科，上海 200025）

脂肪分解是人体能量代谢的核心反应之一。当机体有能量需求时，甘油三酯在特异性的脂肪酶的作用下分解为甘油和脂肪酸为机体提供能量。如果人体脂肪分解出现障碍，就会影响机体能量的平衡进而引发肥胖和胰岛素抵抗等疾病。Fetuin－a是存在于正常哺乳动物血清中的一种糖蛋白，是胰岛素受体酪氨酸激酶天然的抑制剂［1］。人的fetuin－a基因位于3号染色体q27位点上，该位点与代谢方面疾病密切相关［2］。Mathews ST等研究发现，fetuina基因敲除的小鼠能够抵抗高脂饮食引起的肥胖［3］；而临床研究表明体内fetuin－a的升高与肥胖发生密切相关［4］。但目前fetuin－a与肥胖相关的分子机制尚并不清楚。本研究旨在探讨fetuin－a对3T3－L1脂肪细胞脂肪分解的影响及其可能的分子机制。

1 材料和方法

1.1 材料

3T3－L1前脂肪细胞株购自美国ATCC，牛血清胎球蛋白（fetuin－a）购自 Calbiochem 公司；高糖DMEM培养基购自美国GIBCO公司；胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）购自PAA Laboratories Gmb H公司；地塞米松购自Merck公司；甘油检测试剂盒、甘油标准品、1－甲基－3－异丁基黄嘌呤（IBMX）购自Sigma公司；Trizol购自Invitrogen公司；Oligo（d T）Primer、d NTP、M－MLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶为Promega公司产品；Real－time PCR试剂盒购自Takara公司；引物由Invitrogen公司合成；Phospho－HSL（Ser563）、ATGL、β－actin抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；HRP标记的二抗购自Santa Cruz公司；CAMP ELISA试剂盒购自R＆D公司。

1.2 方法

1.2.1 3T3－L1前脂肪细胞的培养与诱导分化3T3－L1前脂肪细胞用含10%FBS的高糖DMEM培养基在37℃，5%CO2条件下培养。细胞汇合后2 d，加入诱导液 A（10%FBS高糖 DMEM，含0.5 m M IBMX、1μM 地塞米松、10μg／ml胰岛素）开始诱导。2天后，换成诱导液B（10%FBS高糖DMEM含10μg／ml胰岛素）。2天后重新换10%FBS高糖DMEM继续培养，隔天换液一次。诱导分化8天，细胞90%以上呈成熟脂肪细胞表型，可用于实验。……