程瑞卿，李军科，陈惠珍

(1.市眼科医院，河北邢台054001;2.河北医科大学第二医院，河北石家庄050000)

根管治疗的目的是彻底消毒根管并进行三维充填，阻止感染再发生。目前认为:导致完善根管充填后出现疼痛、尖周稀疏区不消失甚至扩大、根管再感染等主要与充填后残留在根管系统内的细菌有关。再感染根管内最常检测到的细菌是粪肠球菌(Enterococcus faecalis，Ef)［1-3］，因其能渗透到牙本质小管深层，并能在长期饥饿等恶劣环境下生存，且对碱或药物有较强的耐受性，仅通过机械化学预备、抗感染药物冲洗和根管消毒等传统方法，难以彻底清除。因此，寻找一种能抑制或杀灭根管内粪肠球菌且安全、有效的新型根管消毒剂，对降低根管治疗的失败率有重要的临床意义。近年研究发现:稀土元素中的镧具有抗菌和促进再矿化的作用，可用于防龋，但目前尚无将氯化镧用于根管消毒方面的报道。本研究通过体外建立粪肠球菌感染根管模型，观察比较FC、CP、氢氧化钙丙二醇糊剂和氯化镧4种根管消毒剂对粪肠球菌的抗菌效果，以期对氯化镧的抗粪肠球菌性能做出初步评价，为临床应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 主要材料和设备

甲醛甲酚(FC，上海第二医科大学医药材料厂);樟脑酚(CP，上海运佳黄浦制药有限公司);氢氧化钙丙二醇糊剂(氢氧化钙粉末0.25 mg加1 mL丙二醇配制);氯化镧药剂(LaCl3·7 H2O分子量371.27，纯度＞99.99%)(包头市京瑞新材料有限公司);普通血琼脂培养基(河北医科大学第二医院检验科制作);快速革兰染色液(珠海贝索生物技术有限公司);粪肠球菌(Ef)29212标准株(河北医科大学第二医院细菌室提供);数字显示电子比浊仪(BD phoenix-100Sop，BD公司，美国);一次性细菌培养皿(浙江光电股份有限公司);生物显微镜(OLYMPUS.CH20，江南光电股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 氯化镧药液的配制和实验浓度的确定

取378.45 mg LaCl3·7 H2O置无菌容量瓶中，用三蒸水溶解并定容25 mL，得到103μg/mL的氯化镧原液。采用液体二倍稀释法［4］确定氯化镧对粪肠球菌的最低杀菌浓度(MBC)为8 192 μg/mL (33×10-3mol/L)。

1.2.2 粪肠球菌感染根管模型的建立

取正畸减数而新鲜完整拔除的单根管前磨牙72个，用52.5 g/L NaOCI液浸泡24 h后，常规开髓、拔髓，逐步后退法预备根管至#40，52.5 g/L NaOCI溶液与170 g/L EDTA溶液交替冲洗以去除玷污层。然后用高速金刚砂牙钻切除各牙牙冠和根尖部，取长6 mm的牙根置含有25 mL牛心脑浸液(BHI肉汤)的试管中，121℃高温高压下灭菌20 min，静置于50 mL/L C02培养箱(37℃)内，24 h后观察BHI肉汤无混浊，确定灭菌完全。从灭菌的72个牙齿中随机抽取12个用于阴性对照，其余60个牙根均置于已制备的0.5麦氏浓度粪肠球菌液中，50 mL/L CO2培养箱(37℃)内培养24 h，建立粪肠球菌感染根管模型。

1.2.3 根管消毒药物处理和消毒效果观察

将60个成功建立感染根管模型的牙根随机分为5组，连同阴性对照组共6组，每组12个(表1)，各牙根管经无菌生理盐水荡洗、纸尖吸干后，分别用无菌蜡固定于一次性细菌培养皿底部。按表1分组，用一次性无菌注射器将待测药物注满相应组各牙根管腔后，将放置牙根的培养皿置50 mL/L CO2培养箱(37℃)内培养。分别于培养后第3天和第7天，每组各取6个牙根，#25 H型锉去除根管内消毒剂，无菌生理盐水冲洗，无菌纸尖干燥后，用慢速G-G钻均匀磨取各根管内壁牙本质粉末约4 mg，置含有20 mL BHI肉汤的试管内，50 mL/L CO2培养箱(37℃)内培养72 h后取试管内上层液体，比浊仪测量细菌浊度。

在测量浊度前，各组均分别取少量上层液体接种于普通血琼脂培养基，50 mL/L CO2培养箱(37℃)内培养48 h后，经快速革兰染色，生物显微镜下鉴定细菌种类，以确保无杂菌污染。

表1 标本分组和处理情况

1.3 统计学分析

采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。总体分析用Kruskal-Wallis H检验，因各组数据方差不齐且非正态分布，采用Wilcoxon秩和检验对6组数据进行多重比较，检验水准α=0.05。

2 结果

药物处理第3天取牙本质粉末培养，比浊仪检测显示:阴性对照组浊度最低，阳性对照组最高，两者分别与另5组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);各药物实验组相比，FC组浊度最低，由低到高依次为: FC组＜氢氧化钙组＜CP组＜氯化镧组，其中FC组与氢氧化钙组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，且均低于其他两组(P＜0.05);CP组与氯化镧组相比差异无统计学意义(P＞0.05)(表2)。

药物处理7 d时，取牙本质粉末培养，比浊仪检测显示:仍以阴性对照组浊度最低，阳性对照组最高，两者差异有统计学意义(P＜0.05);各药物实验组的浊度较3 d时均有所下降，且与阴性对照组均无统计学差异(P＞0.05)，而与阳性对照组相比均有统计学差异(P＜0.05);各药物实验组间相比均无统计学差异(P＞0.05)(表2)。

表2 药物处理第3、7天时各组浊度值的比较(±s)

表2 药物处理第3、7天时各组浊度值的比较(±s)

不同字母组间P＜0.05

组别 n 3 d 7 d阴性对照 6 0.068±0.012A 0.070±0.013A FC 6 0.087±0.010B 0.072±0.008A CP 6 0.110±0.014C 0.107±0.046A氢氧化钙 6 0.090±0.009B 0.075±0.010A氯化镧 6 0.112±0.017C 0.077±0.010A阳性对照 6 2.358±0.090D 2.882±0.027B

3 讨论

根管治疗术由于术者的技术水平、采用的技术方法、术后随访时间以及根管治疗疗效评价标准不同，其治疗的成功率从53%到93%不等［5］。许多研究发现:经治根管再感染的主要细菌为粪肠球菌。粪肠球菌具有很强的渗透力，可渗透至牙本质小管深层;并能在长期饥饿等恶劣条件下生存，在条件适宜时可大量繁殖，引起再感染;加之其对碱或药物有较高的耐受性，目前尚缺乏针对粪肠球菌感染的理想消毒药物。FC、CP其消毒作用已得到认可，但由于二者均具有细胞毒性和半抗原性，目前已考虑不推荐使用。氢氧化钙虽具有其自身独特的抗菌活性，但扩散性较差、起效时间慢，一般需2～3周才能到达釉牙本质界处的牙本质外层［6］;抗菌谱较窄，对兼性厌氧菌的抑菌效果较差;难以达到灭菌所需的pH值，目前临床上所用的氢氧化钙多数只能达到pH值9.5～10，因此无法完全消灭粪肠球菌;根管内长期使用氢氧化钙会造成牙齿的抗折能力下降。

镧是稀土元素之一，毒性小而化学性质较活泼，其化合物氯化镧可用于治疗烧伤、妊娠期呕吐、降压等方面。目前，关于口腔方面的研究主要有防龋、抗菌、抗炎等，其作用对口腔内多种细菌如牙龈卟啉单胞菌(Pg)、具核梭杆菌(Fn)、变异链球菌(Sm)、金黄色葡萄球菌(Sa)等有较好的抑制作用，且毒副作用小，提示其有可能成为理想的根管消毒药。

本研究参考Haapasalo等的实验方法［7］，选取单根管离体牙体外建立粪肠球菌感染根管模型，通过比浊法分别检测药物处理3 d和7 d时牙本质粉末内粪肠球菌的含量，来判定氯化镧及其他根管消毒剂抗粪肠球菌的作用。结果显示在3 d时，氯化镧药液的抑菌作用与CP相似，但低于FC和氢氧化钙丙二醇糊剂。说明该药液对粪肠球菌有一定抑制作用，但不能将其全部杀死;在7 d时，FC组、CP组、氢氧化钙丙二醇糊剂组和氯化镧组的抑菌效果接近，且与阴性对照组无显著性差异，说明粪肠球菌全部被杀死。La3+的抗菌机制尚不清楚，有研究者认为La3+抑菌机制是由于稀土离子与钙离子半径接近，是钙离子的拮抗剂，会取代细菌中的钙结合位点，从而使细菌活性受到抑制，甚至引起细菌死亡，从而达到抗菌作用。同时，氯化镧的毒副作用较小［8］，适宜浓度的镧盐用于口腔较安全，因此，氯化镧作为根管消毒剂，较 FC、CP、Ca (OH)2有一定的优势。

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［4］ 刘运德.微生物学检验［M］.北京:人民卫生出版社，2004: 135-139.

［5］ 边专，樊明文.现代牙髓病学［M］.北京:人民卫生出版社，2008:234.

［6］ Molander A，Dahlen G.Evaluation of the antibacterial potential of tetracycline or erythromycin mixed with calcium hydroxide as intracanal dressing against Enterococcus faecalis in vivo［J］.O-ral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2003，96 (6):744-750.

［7］ Hapasalo M，Ørstavik D.In vitro infection and disinfection of dentinal tubules.［J］.J Dent Res，1987，66(8):1375-1379.

［8］ 李江，张伟国，王丽珍，等.镧、铈对小鼠颊粘膜及全身急性毒性作用的观察［J］.上海口腔医学，1998，7(3):130-132.