张 力，谢 英，刘树锋

（河北医科大学河北省实验动物重点实验室，石家庄 050017）

斑马鱼具有繁殖能力强、体外受精和发育、胚胎透明、性成熟周期短、个体小易养殖，可针对治疗药物进行高通量筛选等诸多特点，使其成为后基因组时代生命科学研究中重要的模式脊椎动物之一［1，2］。B细胞活化因子（B cell activating factor，baff）是1999年发现的肿瘤坏死因子超家族新成员，在B细胞发育、功能调节和自身免疫病发病机制中的作用受到关注［1］。研究发现，系统性红斑狼疮（system ic lupus erythematosus，SLE）患者血清中Baff水平与IgG及抗dsDNA自身抗体水平均显著升高［4］。NZB、（NZB/NZW）F1、MRL/lpr等经典SLE模型同样表现出高滴度Baff的发病特征［2］。有文献报道，过表达baff的转基因小鼠可导致SLE样疾病，而拮抗Baff可延缓狼疮易感小鼠的疾病进展［3］。近年来，Baff拮抗剂的筛选成为SLE靶向药物筛选的研究热点之一。

本研究旨在通过分别构建baff过表达重组质粒pEGFP-C1-baff、pEGFP-N1-baff、p IRES2-EGFP-baff，通过胚胎显微注射获得过表达Baff蛋白的转基因斑马鱼，为SLE转基因斑马鱼疾病模型的建立与高通量药物筛选研究提供良好基础。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

性成熟Tuebingen品系斑马鱼引自北京大学生命科学研究院，全自动化控温控光水处理、循环的斑马鱼专用养殖系统日常维护成鱼，水温28℃，pH 7.5，14∶10 h昼夜时间交替，以孵化的丰年虫（artemia）喂养。

1.1.2 试剂

质粒测序工作由上海生工测序公司完成； DM2000marker（北京康为世纪公司）；凝胶回收试剂盒、DNA连接试剂盒、各种限制性内切酶（TaKaRa公司），Trizol（Invitrogen），Phusion聚合酶（NEB），反转录试剂盒（Fermentas Co.），humanβ-actin一抗与GFP抗体（SantaCruz Co.），质粒大小提试剂盒（北京天根生化公司），大肠杆菌……