沈 楠， 银 涛， 王大鹏， 王伟东， 谢 华， 孙艳玲， 林洪丽

(大连医科大学附属第一医院肾内科，辽宁大连116011)

各种进行性慢性肾脏病发展为终末期肾功能衰竭的共同的病理特征为肾间质纤维化［1］。转化生长因子 β1(transforming growth factor β1，TGF － β1)是作用最强的致肾纤维化细胞因子［2－3］，它通过促进肾小管上皮细胞间充质转化(epithelial－mesenchymal transition，EMT)和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的过度沉积最终导致肾脏纤维化［4］。通常情况下，TGF－β先与其Ⅱ型受体结合，再使Ⅰ型受体磷酸化并与前二者结合，激活下游信号转导途径，发挥致纤维化作用［5］。近年来的研究表明核心岩藻糖化对TGF－β1生理功能的发挥具有重要作用［6］，岩藻糖基转移酶8(fucosyltransferase 8，FUT8)是TGF－β1受体糖基化修饰的关键酶［7］。目前尚未见系统研究参与肾间质纤维化的FUT8表达和分布的报道。因此，我们以经典的单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction，UUO)模型为肾间质纤维化模型［8］，通过检测FUT8和TGF－β致纤维化的关键受体活化素受体样激酶 5(activin receptor－like kinase 5，ALK5)在肾脏的表达和分布，以期弄清 FUT8及ALK5在正常肾脏和肾间质纤维化发生和进展中的分布和变化规律，揭示TGF－β在肾间质纤维化中的作用机制。

材料和方法

1 动物

雄性Wistar大鼠，体重180～200 g(大连医科大学动物实验中心提供)，常规饲料喂养。

2 主要试剂

Trizol试剂(Invitrogen)，AMV Hot Start酶、TaKa-Ra RNA PCR Kit 3.0试剂盒，FUT8和 β －actin引物(大连宝生物公司)，兔抗大鼠FUT8、ALK5、α－平滑肌肌动蛋白(α －smooth muscle actin，α －SMA)、Ⅰ型胶原(collagen type I，Col I)、纤维连接蛋白(fibronectin，FN)和 β －actin多克隆抗体(Santa Cruz)，辣根过氧化酶标记抗鼠、抗兔、抗山羊的IgG(H+L)和免疫组化染色试剂盒SP－9003(北京中杉金桥生物技术公司)，FITC－兔抗羊 IgG(H+L)(Invitrogen)，TRITC－驴抗羊IgG(H+L)和FITC－驴抗兔IgG(H+L)(Proteintech)。

3 主要方法

3.1 实验分组 将90只大鼠随机分为3组:(1)正常对照组(control)30只;(2)假手术组(sham)30只，仅切开腹腔并游离左侧输尿管，不予结扎和剪断;(3)UUO组30只，参照文献［9］行UUO术。……