杜 暘，金 鼎，高秀秋

(辽宁医学院附属第二医院，辽宁锦州121000)

人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的增殖分化是牙周组织再生重建的关键。但是在牙周病损区域HPDLFs细胞相对较少。将体外构建的HPDLFs-细胞支架复合体移植入牙周缺损区是一种重要牙周病治疗方法［1，2］，但尚无满意细胞支架可用。2011年10月～12月，我们将丹参复合在丝素/胶原支架上，得到复合丹参的丝素/胶原支架，并用其体外培养HPDLFs，效果满意。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选临床上12岁左右因正畸拔除的健康前磨牙，家蚕的桑蚕茧。主要试剂:胶原(上海生工生物试剂公司，主要成分为Ⅰ型胶原)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料公司产品)，DMEM高糖培养基(GIBCO，美国)，胰蛋白酶(Amresco)，细胞培养板(Costar，美国)，抗广谱角蛋白抗体(武汉博士德公司)，抗波形蛋白抗体(Vimentin)，丹参提取物(美晨药业有限公司)。仪器设备:倒置显微镜(日本Olympus)，S-3000N型扫描电镜(Hitachi，日本)，HPll00高效液相色谱仪，CO2恒温培养箱(Thermo，美国)，冷冻干燥机(VIRTIS GENESIS 25 LE型)，超净工作台(国产TDGC-2J-1型)。

1.2 方法

1.2.1 复合丹参的丝素/胶原细胞支架的制备 蚕丝置于98～100℃的含0.1%的Na2CO3溶液中处理30 min，重复3次，晾干后溶解于摩尔比为1∶2∶8的CaCl2·CH3CH2OH·H2O三元溶剂中，在(70± 2)℃搅拌溶解，依次进行透析、过滤、浓缩后获得丝素水溶液。按胶原丝素水溶液质量比80∶20混合，添加一定量的戊二醛，充分搅拌，用冷冻干燥机，分别依次于－80℃、－40℃及－20℃冷冻6 h，随后减压干燥，得到胶原/丝素支架。在75%乙醇中灭菌处理后，紫外线照射，晾干。每个支架均匀滴入大约含有20 ng的丹参，再次冻干备用。

1.2.2 复合支架上丹参释放情况的检测 取8块复合丹参的支架、2块直接滴入20 ng丹参的空白支架，分别为观察组和对照组。……