柯 金，胡喜梅，周水阳，包维莺，范燕琴，陆 翠，朱锐锋，王恒石，刘 媛

(上海市松江区中心医院，上海201600)

最近研究发现，许多肿瘤中存在具有自我更新特性的细胞亚群即肿瘤干细胞，是引发肿瘤并维持其生长的根源，并在肿瘤的复发、转移中起着决定性作用［1～5］。但结直肠癌组织中有无肿瘤肝细胞尚不明确。2011年8～11月，我们检测了60例结直肠癌患者肿瘤组织中的肿瘤干细胞标志物CD133和Ki67、survivin。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2010年6月～2011年6月本院和上海市松江区方塔中医院收治的60例结直肠癌患者结直肠癌根治术切除肿瘤组织标本。其中男26例，女34例;平均年龄64岁。结肠癌34例、直肠癌26例;高分化腺癌10例、中分化腺癌43例、低分化腺癌7例;pTNM分期Ⅰ期11例、Ⅱ期20例、Ⅲ期26例、Ⅳ期3例。患者术前均未行放化疗。

1.2 CD133和Ki67、survivin检测方法 采用Envi-sion两步法检测标本中 CD133、Ki67、survivin的表达。标本用石蜡包埋，制成4～5 μm厚切片;脱蜡、梯度水化;切片置于pH值为6.0柠檬酸缓冲液中进行煮沸处理10 min，室温冷却，PBS漂洗;分别滴加一抗CD133多克隆抗体、Ki67单克隆抗体、survivin单克隆抗体，37℃孵育1 h，PBS冲洗;加适当比例稀释的二抗，37℃孵育20～30 min，PBS冲洗;DAB显色;苏木素复染，酒精梯度脱水，干燥，中性树胶封片;显微镜观察。以PBS替代一抗作为空白对照，以已知阳性切片为阳性对照。

每张切片随机取5个高倍视野(×400)，分别计数100个细胞中阳性细胞数，取其平均值定义为该细胞的阳性细胞百分比。CD133为跨膜蛋白，定位于细胞膜及细胞质，survivin定位于细胞质或细胞核，Ki67定位于细胞核，以出现棕黄色高出背景色为阳性细胞。……