王庆 杨华 金瑞良 胡忠义 刘忠华

Mtb是引起结核病的病原菌。据世界卫生组织统计，全球结核病发病率以每年1%的比率上升，约每年新增患者880万［1］，其中痰涂片阳性的患者不到总数的1/2。《2000年全国结核病流行病学抽样调查报告》［2］显示，我国现有活动性肺结核患者451万，菌阳肺结核患者仅为196万。因此，活动性肺结核在常规检测（培养和涂片）中检出率过低是直接导致结核病在我国和全球广泛流行的根本原因。血清学诊断作为对结核病菌阳及菌阴患者均有效的检测手段，一直是结核病诊断的研究热点。

近期国外报道，Mtb基因缺失区域4（RD4）中蛋白Rv0222用于血清学诊断具有较高的敏感度，同时在卡介苗接种者和非结核病患者中有较好的特异度，尤其对免疫缺陷患者较为敏感［3］。本研究构建了重组蛋白Rv0222，探讨其用于结核病血清学诊断的可行性。现将结果报告如下。

材料和方法

一、材料

1.菌种和载体：Mtb H37Rv标准菌株，大肠埃希菌DH5α；BL21（DE3）和p ET30a载体（上海市肺科医院保存），p MD18－T载体（购自大连宝生物工程有限公司）。

2.工具酶和试剂：限制性内切酶、T4连接酶、Tap聚合酶、异丙基硫代－β－D－半乳糖苷（IPTG）、纯化试剂盒（购自大连宝生物工程有限公司），组氨酸标签（His－tag）纯化试剂盒（购自美国 Novagen公司），辣根过氧化物酶标记的羊抗人免疫球蛋白G（HRP－IgG）（购自美国Sigma公司），引物合成和测序由生工生物工程（上海）有限公司完成。

3.检测血清样本：（1）实验对照血清：2份阴性对照血清为上海市肺科医院门诊正常体检确认的健康人血清，2份阳性对照血清来自该院结核科确诊的活动性肺结核患者。……