郑声琴 何 杰 郑 勤 张全安

结肠癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一，发生具有多阶段、多因素的特征，在此过程中涉及癌基因的突变和活化、抑癌基因的丢失或表达失调以及凋亡调节机制紊乱等遗传学改变[1，2]。再生基因 Ⅳ (regenerating gene Ⅳ,Reg Ⅳ) 是新发现的1个癌基因，其有可能参与肿瘤尤其是消化道肿瘤的发生和发展。基因表达的序列分析 (serial analysis of gene expressi on,SAGE) 结果得到： Reg Ⅳ在结肠正常黏膜、结肠腺癌、 胰腺癌、 胃癌和前列腺癌中均表达，尤其在结直肠腺瘤癌变区其转录水平上调特别明显，但是在结肠正常黏膜 Reg Ⅳ 基因呈低表达[3]。通过 SAGE表达谱分析认为，Reg Ⅳ基因可能是消化系统癌微转移的特异性标记物[4]，其表达上调可能与预后不良有关。我们采用免疫组织化学法,检测Reg Ⅳ蛋白在结肠癌中的表达情况，旨在探讨Reg Ⅳ在结肠癌发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

选取我院病理科 2008年～2010 年收集的102例结肠癌石蜡标本 (均取自肿瘤原发灶，均经病理检查确诊)。其中男性 70例，女性32例，年龄 31～75 (51± 30) 岁，术前均未行放疗和化疗。50例正常结肠黏膜组织术中取出经4%多聚甲醛固定后制成石蜡标本。免疫 Reg Ⅳ蛋白多克隆抗体为Santa cruz产品，稀释度为 1∶200； SABC免疫组织化学试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京天根有限公司。

1.2 方法

结肠癌标本用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续切片 (厚度 4 pm)，其中一片用于常规HE 染色，其余用于免疫组织化学。石蜡切片经脱蜡水化后入PBS (pH7.4)，经甲醇- H2O2，室温孵育20 min，除去内源性过氧化物酶活性，蒸馏水洗3遍；微波修复抗原，滴加抗原修复液室温 10 min，甩去血清后滴加1 ∶200 Reg Ⅳ多抗，4℃ 过夜，0.5 mol/L PBS洗2 min 3 次；……