石书红 张 辉

多药耐药(MDR)是化疗失败的主要原因，寻找有效的逆转剂一直是医学界研究的热点。甲基莲心碱(neferine,Nef)是从睡莲科植物莲成熟种子的绿色胚芽中提出的1种双苄基异喹啉生物碱，是1种心血管方面副作用较小的新的钙通道阻滞剂[1]。我们已研究发现Nef具有增强化疗药物抑制肿瘤细胞增殖作用[2]，在体外有化疗增敏作用,本身无细胞毒作用[2]，本实验进一步研究Nef对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性逆转作用及其机制，为开发具有临床意义的MDR逆转剂提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

甲基莲心碱(neferine,Nef)由同济医学院药理学教研室提供；长春新碱(vincristine,VCR)为广州明兴制药厂生产；维拉帕米(verapamil,VRP)为上海禾丰制药有限公司产品；MTT(噻唑蓝)为Sigma公司产品；鼠抗人Bcl-2单抗为北京中山生物工程公司产品；SP免疫组化试剂盒为福州迈新生物公司产品；小牛血清购自杭州四季清；RPMI 1640培养基为Gibco BRL公司产品。

1.2 细胞培养

SGC7901/VCR和SGC7901细胞由第四军医大学西京医院全军消化病研究所惠赠。用含10%小牛血清的RPMI 1640细胞培养液，在37℃、5% CO2恒温培养箱中培养。其中SGC7901/VCR 细胞加0.8～1 μg/ml VCR维持耐药，撤药后2周进行实验。选对数生长期细胞进行实验。

1.3 MTT法检测VCR或Nef对肿瘤细胞增殖的影响

参照文献[2]方法，以0.5×105/ml cell接种于96孔培养板，每孔100 μl,37℃、5% CO2条件下培养过夜后，加入不同浓度的Nef和(或)VCR，调零组和对照组加相应体积的培养液，每组设4个平行孔。培养72 h后，每孔加5 mg/ml MTT 20 μl(调零组除外)，再培养4 h，倾去培养液，加DMSO 100 μl/孔，待甲臢完全溶解后，应用酶联免疫仪在波长570 nm处调零后读取吸光度值(A)。……