余晓玲， 张韶湘， 付 义

(昆明市中医医院，云南中医学院第三附属医院， 云南 昆明 650011)

红景天和三七是本院院内制剂“七龙天”的两种重要药材。红景天为景天科多年生草本植物，全世界有90多种，中国有70多种，进行过化学成分研究的有20 多种[1]，红景天具有增强机体免疫机能、降血脂，提高体内SOD 活性，增强运动耐力等多方作用[2]。三七[Panax notoginseng(BurK.)F.H.Chen]为五加科人参属植物，是中国特有的名贵中药材[3]。一般认为三七总皂苷(PNS)是三七的主要药理活性成分，近年的研究表明 PNS具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用[4～8]。为提高两种药材有效成分的提取率，需对提取工艺进行优选。一般中药材的提取方法主要有：冷浸发[9]、渗漉法[10]、煎煮法、醇回流法[11]、超声提取法[12]，其中以超声提取法的提取率最高，但不宜于工艺上放大进行大规模生产[13]。“七龙天”制剂最后将进行大规模生产所以舍弃超声提取法而选用提取率次之的醇回流法进行提取。本次试验采取三七、红景天按一定比例混合后用乙醇提取，最后以红景天苷含量为参考指标的方法选择最佳提取。

1 材料与仪器

1.1 材料 三七；红景天；红景天苷对照品(中国生物制品检定所，批号：110818-200404)；甲醇、乙醇均为分析纯；乙腈为色谱纯；纯水；磷酸。

1.2 仪器 电子天平；循环水式多用真空泵；旋转蒸发仪；电子恒温水浴锅；高效液相色谱仪(Agilent1101)；色谱柱(ZORBOX 4.6×250nm)；超声仪 。

2 实验方法

2.1 提取

2.1.1 正交试验设计 采用正交实验法，选定乙醇浓度、提取时间、提取次数、料液比作为考察的4个因素，各取3个水平(见表1)按照L9(34)正交表进行实验。

表1 因素水平

2.1.2 提取流程工艺设计 三七红景天混合→乙醇回流→合并滤液→浓缩→干燥待测

2.1.3 提取实验结果 按表1选择因素、水平和提取流程进行试验，结果见表2。

表2 提取实验结果

2.2 含量测定

2.2.1 流程设计 取1 g浸膏→超声溶解30 min→定容至25 mL→过滤→滤液待测。

2.2.2 溶剂选择 以甲醇作为溶剂。

2.2.3 色谱分析条件 色谱柱ZORBOX 4.6×250 nm。

2.2.4 检测波长 红景天苷的最大吸收波长为278 nm，以此作为检测波长。

2.2.5 流动相选择 进样5 uL，流速1 mL/min的条件下以乙腈水=7∶93，水中加0.05‰磷酸时的峰型良好，红景天苷与其他组分达基线分离。以此作为测定条件。

2.2.6 标注曲线的绘制 精密称取红景天苷标准品2.5 mg，甲醇溶解定容至25 mL(C=0.1 mg/mL)。分别进样5、10、15、20、25、30 uL，测定峰面积，绘制标准曲线。见图1。

图1 红景天苷标准曲线

2.2.7 样品含量测定 取3份样品，按设计流程重复3次测定，计算平均值。结果见图2，图3及表3。

图2 红景天苷标准品HPLC图

图3 样品HPLC图

表3 3次测得峰面积

3 结果和讨论

根据峰面积用标准曲线法计算红景天苷浓度和含量结果见表4，表5。

表4 红景天苷含量

表5 正交试验数据分析

注：Ⅰj、Ⅱj、Ⅲj表示不同因素的三个水平；R表示极差，既某因素水平之间平均值的最大值与最小值之差。

一个因素对实验结果的影响最大，这个因素就是最主要因素，在正交表中影响的大小通过极差类反应，极差值大，影响也大，反之亦然。从表中计算结果来看，RD>RB>RC>RA因此，影响提取效率的主要因素为回流次数，其次是回流时间、料液比，醇浓度的影响最小。在同一因素中，哪一个水平最好，可以通过每一个水平的实验平均值Ⅰj、Ⅱj、Ⅲj比较来确定，值最大，水平最好。比较可知ⅢA>ⅡA>ⅠA；ⅢB>ⅠB>ⅡB；ⅡC>ⅢC>ⅠC；ⅢD>ⅡD>ⅠD 。通过上述分析得最佳工艺组合为AⅢBⅢCⅡDⅢ。即10倍75%的乙醇，回流3次，每次2 h。

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