任 刚 于 国

S期激酶相关蛋白2 (S-phase kinase-associated protein 2，Skp2)促进泛素介导的细胞周期素依赖激酶抑制蛋白p27Kip1降解，研究发现Skp2在乳腺癌、胃癌、大肠癌等多种肿瘤中表达增强，同时往往伴有p27Kip1水平的降低[1～3]。本研究应用免疫组化技术，测定胆囊癌组织中Skp2和p27Kip1的表达情况，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

收集解放军总医院1999年7月至2007年2月手术切除的、具有完整临床病理资料的原发性胆囊癌标本78例。其中男性32例，女性46例，中位年龄62岁。伴结石患者40例。腺癌58例，鳞癌及腺鳞癌10例，其他类型10例。高分化13例，中分化30例，低分化35例。根据Nevin标准进行肿瘤临床分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期3例，Ⅲ期24例，Ⅳ期17例，Ⅴ期32例。78例中50.0%(39/78)患者神经受侵犯，26.9%(21/78)血管受侵，56.4%(44/78)伴有坏死。64.1%(50/78)行根治性手术，35.9%(28/78)行姑息手术，21.8%(17/78)患者术后辅助放化疗。另外，按照随机方法，选取同一时期20例癌旁非癌组织作为对照。

1.2 方法

将标本石蜡块进行连续切片，厚4 μm，贴于已经处理的载玻片，置于烤片机上烤干以供免疫组化染色，采用PV 6 000二步法检测，具体步骤按照说明书进行。鼠抗人p27Kip1单克隆抗体(1B4)、鼠抗人Skp2单克隆抗体(1G12E9)、枸橼酸抗原修复液(pH 6.0)、抗体稀释液、二步法PV 6 000免疫组化检测试剂盒、浓缩型DAB试剂盒及PBS液均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。稀释比例1∶50。Skp2选用乳腺癌作为阳性对照；p27Kip1选用扁桃体作为阳性对照，2种指标均用PBS代替一抗作为阴性对照。随机选择10个高倍视野，每个视野至少计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分率。以细胞核出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，其中p27Kip1阳性细胞数≥50%为阳性，Skp2阳性细胞数≥5%为阳性。……