周自华 陈尚忠 廖海球 徐宁红 邹 媚

结肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，发病率居恶性肿瘤的第4～6位，近来发病率有上升的趋势，其根治术后的5年生存率约50%。MACC1( metastasis -associated in colon cancer l，MACC1)基因是由Stein等于2009年发现的与结肠癌转移、侵袭相关的新基因[1]。但有关MACC1在肿瘤，尤其是在结肠癌发生发展中的具体机制仍不明确。 本实验将观察MACC1在结肠癌中的表达情况以及与临床病理因素之间的关系和对预后的影响，为判断预后及指导临床治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院2001年1月至2005年2月间经外科手术切除，能随访到的患者中，随机选取80例结肠癌组织标本以及20例经肠镜活检为正常的黏膜标本。所有病例资料完整，均经病理组织学确诊。分期采用国际抗癌协会( UICC)2002年第6版TNM分期系统进行临床分期。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学LSAB法 采用免疫组织化学LSAB法(labeled streptavidin-biotin，抗生物素蛋白链菌素-生物素标记法)，Rabbit Anti- MACC1、DAB染色试剂盒及免疫组化染色试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。按照免疫组化试剂盒的操作说明进行：① 4 μm连续切片，裱片后于60℃恒温烤箱中烘烤过夜，晾干备用；②二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；③3%H2O2室温孵育15 min，消除内源性过氧化物酶；④微波抗原修复，切片放入盛有EDTA修复液(工作液)的容器中置于微波一抗孵育4℃冰箱过夜；孵育37℃孵育15 min；二抗孵育37℃孵育15 min；炉中，高温5 min，自然冷却；⑤PBS漂洗3 min×2次；⑥显色，苏木精复染。乙醇脱水。中性树脂封片，光学显微镜下观察抗原在癌组织中表达。

1.2.2 结果判断 根据阳性表达部位的信号强度和阳性表达的细胞数进行综合评分。……