潘 敏 余进进 黄小艳 杨文霞 王会平

索拉非尼是首个口服的小分子多靶点抗肿瘤药物，不仅可以抑制RAF 激酶，还能抑制血管内皮生长因子 -2(VEGFR-2)、血管内皮生长因子 - 3(VEGFR-3)以及血小板源生长因子-β(PDGFR-β )的酪氨酸激酶的活性，通过双重机制抑制肿瘤生长，被称为多激酶抑制剂[1]。本实验研究索拉非尼与紫杉醇单独给药及两药不同给药顺序联合给药，对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响，为动物实验和临床试验提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

人卵巢癌SKOV-3细胞株由无锡市第四人民医院中心实验室传代保存；RPMI-1640、四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂盒、Annexin Ⅴ/PI双染凋亡试剂盒、细胞周期试剂盒均购自南京凯基生物科技发展有限公司，标准新生牛血清购自杭州四季青生物公司；实验药物索拉非尼为德国拜耳公司产品。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 人卵巢癌SKOV-3细胞培养在含10%新生牛血清及青、链霉素双抗的RPMI-1640培养基中，在37℃、5%CO2的饱和湿度恒温培养箱中培养，2～3天换液1次，待细胞铺满瓶底70%～80%时，用0.25%胰蛋白酶消化、传代继续培养，取对数生长期细胞进行实验。

1.2.2 MTT检测索拉非尼作用于人卵巢癌SKOV-3细胞株的抑制率 取对数生长期细胞，以最适密度(5 000个/100 μL)接种于 96孔板，置于37℃含5%CO2的饱和湿度恒温培养箱中继续培养24 h，吸尽培养基，PBS洗两遍，加入稀释成不同浓度的药物各100 μL，每组设置3个复孔，置培养箱中继续培养，实验中止前4 h每孔加入50 μL的1×MTT，继续培养4 h，吸尽上清液，每孔加入DMSO 150 μL，微振荡器上振荡溶解10 min，以空白对照孔调零，在自动酶标仪490 nm波长处，测定每孔的吸光度(A)值。……