柳 军 于东升 尚 靖 孙宏斌 张陆勇

五环三萜化合物广泛分布于自然界中，其生物活性和药理活性丰富多样，如抗炎、保肝、抗艾滋病、抗癌、抗糖尿病、降血脂、抗动脉粥样硬化和免疫调节等作用[1]。我们之前曾报道过山楂酸及其相关的五环三萜有降糖和降脂功效[2]。为了探讨五环三萜在治疗白血病方面的作用，我们研究了五环三萜对人早幼粒白血病细胞HL-60的作用。

科罗索酸和山楂酸是天然五环三萜化合物。山楂酸富集于橄榄皮中，2α，3β-二乙酰氧基熊果-12-烯-28-酸，2α-乙酰氧基-3β-羟基熊果-12-烯-28酸均是科罗索酸的衍生物[3]。我们主要考察山楂酸、科罗索酸、2，3-二乙酰氧基科罗索酸和2-乙酰氧基科罗索酸对HL-60细胞的生长抑制作用和促进其分化诱导的作用。

1 材料与方法

1.1 化合物与试剂

山楂酸(化合物1)、科罗索酸(化合物2)、2，3-二乙酰氧基科罗索酸(化合物3)和2-乙酰氧基科罗索酸(化合物4)由中国药科大学新药研究中心提供，纯度>95%。全反式维甲酸(ATRA)、NBT购自Sigma公司，RPMI 1640培养购自Gibco Life Technologies公司，胎牛血清购自杭州四季青生物公司(Hangzhou Sijiqing Bio-material Co.，Ltd.，China)，LDH试剂盒购自南京建成生物公司。

1.2 细胞培养

人早幼粒白血病细胞HL-60培养于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素的RPMI 1640培养基中，置37℃、5% CO2培养箱中培养。2～3天传代1次，取对数生长期细胞用于实验。将HL-60细胞悬液调整为1×105个/mL，接种于96孔培养板。化合物溶于DMSO，用RPMI培养基稀释，使最终加入培养基中的DMSO浓度低于0.1%。

1.3 四氮唑蓝比色(MTT)法

将人早幼粒白血病细胞HL-60悬液调整为1×105个/mL，接种于96孔培养板，每孔180 μL，实验组分别加入4种不同浓度的化合物，每组3个复孔，37℃、5% CO2培养箱中培养，3天后各孔加入MTT 20 μL，继续培养4 h，测定其在570 nm下的吸光度。