刘 菊，刘少祥，潘海龙，严君喜

(成都生物制品研究所，四川 成都 610023)

卡介苗(BCG)是一种用来预防儿童结核病的预防接种疫苗。目前，世界上多数国家已将BCG列为计划免疫必须接种的疫苗之一。世界卫生组织(WHO)关于BCG的第一个国际标准品是在1965年建立的，WHO和欧洲药典对BCG的鉴别方法也是传统的微菌落观察法、抗酸染色法等［1-2］，然而BCG株通常具有不同基因型多个亚群，第一代国际标准品和传统的鉴别方法难以满足当今疫苗生产厂家质量控制的要求。WHO有关BCG会议建议新的国际标准品来取代第一代BCG国际标准品，以及更科学的鉴别方法，从而确保疫苗的质量管理，并提议将丹麦株、东京株和莫斯科株作为首选标准品候选株［3-5］。

目前有关结核分枝杆菌H37Rv、牛型分枝杆菌都完成了基因组测序，与H37Rv毒株进行比较，可以发现不同BCG菌株有16个长度1 903～12 733 bp(碱基对)不等的缺失区域(Regions of Difference)，这些区域被依次命名为 RD1 ～ RD16［6］，因此根据这个基因水平上的特点可将BCG与其它牛型分枝杆菌和其它分枝杆菌菌群区分开来，而且还能鉴别不同的亚株［7］。本文初步研究了利用多重PCR方法对包括3个候选株在内的不同BCG亚株进行鉴别试验。

1 材料

1.1 卡介菌DNA及对照品

丹麦株BCG、莫斯科株BCG、东京株BCG、巴西株BCG、英国株BCG及阴性对照用的鲑鱼DNA由英国国家生物制品及标准化控制研究所提供。

1.2 BCG

丹麦株BCG(平均活菌数7.5×106/支，批号:D1331-2)，丹麦斯塔滕血清研究所;莫斯科株 BCG(平均活菌数6.0×106/支，批号:254-2)，莫斯科传染病寄生虫病中心;东京株BCG(平均活菌数4.9×106/支，批号:TY-1002)，日本 BCG实验室。……