郭 冉，刘洁婷，吴 丹，刘海峰，初彦辉

(牡丹江医学院 1.生理教研室，2.黑龙江省抗纤维化生物治疗重点实验室，黑龙江 牡丹江 157011)

重组人转化生长因子β1原核表达及多克隆抗体制备

郭 冉1，刘洁婷2，吴 丹2，刘海峰2，初彦辉2

(牡丹江医学院 1.生理教研室，2.黑龙江省抗纤维化生物治疗重点实验室，黑龙江 牡丹江 157011)

目的 克隆人转化生长因子β1(TGF-β1)基因，原核表达TGF-β1蛋白，制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法 应用RT-PCR技术扩增人TGF-β1基因序列，构建pET-28a-TGF-β1重组质粒。转化至E.coli BL21(DE3)中，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Western-blot检测目的蛋白的抗原性。免疫新西兰白兔，获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体，间接ELISA法检测多克隆抗体效价，Westernblot技术进行抗体特异性检测。结果 获得了TGF-β1编码序列和表达载体，目的蛋白主要存在于超声破碎后的包涵体中;经Western-blot检测目的蛋白存在抗原性;获得纯化的兔抗人多克隆抗体效价达1∶10 000。结论 获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体效价较高，具有良好的特异性。

转化生长因子β1;抗纤维化;原核表达;多克隆抗体

转化生长因子β(TGF-β)对瘢痕成纤维细胞的生物学效应起到主要的调控作用并参与瘢痕形成中的调节活动，目前研究最为广泛［1-2］。TGF-β被认为是促进纤维化发展的最重要的生长因子［3］。在创伤中TGF-β1的表达增加，同时还能刺激成纤维细胞产生内源性TGF-β1，甚至加入外源性的 TGF-β1可以增加创伤中胶原纤维蛋白和炎性细胞的数量［4-5］。正反馈刺激作用 TGF-β1可加速体外培养的瘢痕疙瘩细胞增殖和分裂并促进胶原的基因表达和蛋白合成