陈晓青，杨 荣，张 磊，邱文洪，李 艳，黄 丹

(江汉大学医学院1.医学实验中心，2.基础部，湖北 武汉 430056)

人血管内皮细胞生长因子受体1酪氨酸激酶的克隆与表达

陈晓青1，杨 荣2，张 磊2，邱文洪2，李 艳1，黄 丹1

(江汉大学医学院1.医学实验中心，2.基础部，湖北 武汉 430056)

目的 克隆人血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1酪氨酸激酶(VEGFR1/Flt-1)基因，构建其表达载体，为其应用研究奠定基础。方法 应用RT-PCR技术，对可溶性血管内皮细胞生长因子受体1(sVEGFR1/sFlt-1)胞外区前四个结构域基因片段进行扩增，亚克隆至pUCl8质粒，进行测序后，建立其表达载体，获得重组质粒pSGL-gpp-F，并将其转化至Streptomyces lividans TK24，获得基因工程菌株pSGLgpp-F，对其培养上清液进行SDS-PAGF及Western blot分析。结果 在信号肽gpp的引导下，sFlt-1在S.lividans中获得成功分泌表达，且表达的sFlt-1具有和配基VEGF结合的生物学活性，但在信号肽vis的控制下，未获成功表达。结论 sFlt-1经分离提纯后，可用于与抑制血管生成相关的疾病的研究，而利用重组sFlt-1建立VEGF拮抗剂筛选模型，对于从组合化学库等天然来源的化合物中，提取高通量、大规模药物的筛选提供了可能。

血管内皮生长因子受体;基因表达;酪氨酸激酶;克隆

血管内皮生长因子(VEGF)是一个具有相似结构的生长因子家族，其成员均属于酪氨酸蛋白激酶，亦均属于同源二聚体糖蛋白，如VEGF-A、B、C、D和胎盘生长因子(PIGF)［1］，以及如受体 R1(Flt1)、R2(KDR)、R3(Flt4)等，其家族成员均具有促进细胞增殖，加速血管生成，增加血管通透性等功效，而血管生成参与了组织再生、伤口愈合、子宫内膜周期性增生以及肿瘤的转移和血管生成等多种病理和生理过程。……