吴丽苹

（汕头市质量计量监督检测所，广东 汕头 515000）

一、PCR的原理及技术发展

聚合酶链反应技术是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片断的方法。该技术于1985年由美国的KaryMullis等人首创并由美国,Cetus公司开发。其原理是：在存在DNA模板、引物、DNTP、适当缓冲液(Mg2+)的反应混合物中，在热稳定DNA聚合酶的催化下，对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增。这种扩增是通过模板DNA、引物之间的变性、退火(复性)、延伸等三步反应为一个周期，循环进行，使目标DNA片段得以扩增。由于每一周期产生的DNA片断均能成为下一次循环的模板，故PCR产物以指数形式增加。

目前，聚合酶链反应技术本身获得长足进步，可靠性不断提高，以聚合酶链反应技术为基础的相关技术得到了很大的发展。如反相PCR(lnverse-PCR)、反转 PCR(RT-PCR)、随机扩增多态性 DNA技术 (RAPD)，免疫 PCR(lmmuno-PCR)，不对称 PCR(Asymmetric PCR)、多重PCR(MultipleprimerPCR)、固相PCR等。在关键技术上也有所进步，如热循环仪在质量和技术上的发展；引物的设计可通过计算机和网络来实现；已发展出多种具有各种不同特性的聚合酶体系和酶反应体系；目前已开发出了一系列的DNA聚合酶试剂盒，简化了聚合酶链反应技术操作，提高了实验的重现性。

二、聚合酶链反应技术检测食品中沙门氏菌

1.模板的制备。聚合酶链反应技术检测方法的可靠性一部分依赖于目标模板的纯度和足够的目标分子数量，大多数聚合酶链反应检测仍要求富集步骤。研究表明，如果细菌在检测前可从食品原样中分离、浓缩、纯化，许多快速分子学方法的检测效果可得以改善。……